что значит her2 положительный

Определение HER2 статуса опухоли методом СISH

Описание

Определение HER-2 статуса опухоли методом CISH — исследование предрасположенности к развитию опухоли и подбор своевременного адекватного лечения при раке молочной железы (РМЖ) или раке желудка (РЖ).

HER-2 (HER-2/neu) — human epidermal growth factor receptor-2 — это белок, который может влиять на рост раковых клеток. Он создается специальным геном, который называется ген HER-2/neu. HER-2 является рецептором для определённого фактора роста, который называется человеческим эпидермальным фактором роста, естественным образом существующим у человека. Когда человеческий эпидермальный фактор роста прикрепляется к рецепторам HER-2 на раковых клетках груди, он может стимулировать рост и деление этих клеток. В здоровой ткани HER-2 передаёт сигналы, регулирующие пролиферацию и выживаемость клеток, но гиперэкспрессия HER-2 может обусловить злокачественную трансформацию клеток.

Гиперэкспрессия HER-2 при некоторых подтипах РМЖ ведёт к усилению пролиферации и ангиогенеза, нарушению регуляции апоптоза (генетически запрограммированного самоуничтожения клеток). Показано, что при раке молочной железы гиперэкспрессия этого рецептора в ткани опухоли ассоциирована с более агрессивным течением болезни, повышенным метастатическим потенциалом опухоли и менее благоприятным прогнозом. Открытие связи гиперэкспрессии HER-2 с неблагоприятным прогнозом РМЖ привело к поиску таких подходов к лечению, которые направлены на специфическое блокирование онкогена HER-2/neu (таргетная анти-HER2-терапия).

Рак молочной железы (РМЖ) — злокачественная опухоль железистой ткани молочной железы. РЖМ занимает первое место среди всех злокачественных заболеваний у женщин.

В зависимости от наличия биологических маркёров опухоли — экспрессии гормональных рецепторов (эстрогена и/или прогестерона), экспрессии HER-2 — выделяют гормон-рецептор-положительный, HER-2-положительный и тройной негативный РМЖ.

HER-2/neu-положительные (HER-2+) типы рака молочной железы отличаются высокой экспрессией белка HER-2/neu.
HER=2/neu-негативные (HER-2-) типы рака молочной железы отличаются низкой экспрессией или отсутствием белка HER-2/neu.
Считается, что у одной из пяти женщин с раком груди опухоль является HER-2-положительной. Большинство раковых опухолей молочной железы являются гормонально-зависимыми: эстрогены и прогестерон оказывают на них стимулирующий эффект (пролиферативный и неопластический). При HER-2-положительном раке молочной железы на поверхности опухолевых клеток присутствует избыток HER-2-рецепторов. Данное явление носит название «положительный HER-2-статус» и диагностируется у 15–20% женщин, страдающих РМЖ.

HER-2 — рецептор эпидермального фактора роста человека 2-го типа, который присутствует в тканях и в норме, участвуя в регуляции деления и дифференцировки клеток. Его избыток на поверхности опухолевых клеток (гиперэкспрессия) предопределяет быстрый неконтролируемый рост новообразования, высокий риск метастазирования, низкую эффективность некоторых видов лечения. HER-2-положительный РМЖ является особенно агрессивной формой данного заболевания, поэтому точное определение HER-2-статуса имеет ключевое значение для выбора тактики лечения.

Рак желудка (РЖ) — злокачественная опухоль, происходящая из эпителия слизистой оболочки желудка.

РЖ занимает 4-е место в структуре онкологической заболеваемости и 2-е место в структуре онкологической смертности в мире. Заболеваемость РЖ у мужчин в 2 раза выше, чем у женщин. Россия относится к регионам с высоким уровнем заболеваемости РЖ и смертности от данного заболевания. Диагностика РЖ на ранних стадиях затруднена из-за длительного бессимптомного течения заболевания. Часто РЖ выявляют на поздних стадиях, когда 5-летняя выживаемость не превышает 5–10%, а единственным методом лечения остаётся химиотерапия.

Основным методом лечения РЖ является хирургический. Однако у большинства пациентов на момент постановки диагноза определяется распространённый опухолевый процесс, что делает невозможным выполнение радикальной операции и требует проведения системной лекарственной терапии. Проведение химиотерапии статистически достоверно увеличивает общую выживаемость больных метастатическим РЖ, улучшая качество их жизни.

Онкоген HER-2 (erbB-2) был первоначально идентифицирован в опухолях молочной железы. Амплификация и гиперэкспрессия данного гена является относительно специфическим событием для карцином молочной железы и практически не встречается в опухолях других локализаций. Рак желудка представляется одним из немногих исключений: активация HER-2 отмечается примерно в 10–15% злокачественных новообразований этого органа и коррелирует с агрессивным течением заболевания.

Гиперэкспрессия HER-2 является фактором неблагоприятного прогноза. По данным разных исследований, амплификация гена HER-2 у больных РЖ коррелирует с низкими показателями общей выживаемости.

Для оценки HER-2-статуса при РЖ и РМЖ используют СISH метод (хромогенная in situ гибридизация).

CISH — альтернативный нефлуоресцентный метод, при котором выявление гибридизованных ДНК-зондов происходит с помощью иммунопероксидазной реакции.

Необходимы гистологический протокол и иммуногистохимический протокол, стекло ИГХ.

Интерпретация результатов
HER-2 CISH определяет, есть ли повышенное количество (амплификация) гена HER-2 в клетках опухоли молочной железы.

Источник

Определение HER2 методом ИГХ

Иммуногистохимическое исследование маркера HER2 при раке молочной железы.

Иммуногистохимическое исследование маркера HER2 это неотъемлемая часть ведения пациентов с инвазивным раком молочной железы. В данной статье мы разберем основные моменты исследования данного маркера врачом-патологоанатомом.

Что такое HER2?

Аббревиатура HER2 расшифровывается как Human Epidermal Growth Factor Receptor-2 (его синонимы: HER2/neu, NEU, NGL, TKR1, c-erbB2, CD340, ERBB2), что переводится как рецептор человеческого эпидермального фактора роста 2. Данный рецептор является членом семейства рецепторов нескольких факторов роста, которые действуют на внутриклеточные сигналы через МАР- и PI3-киназы, регулируя клеточный рост и развитие клетки. Ген ERBB2 локализуется на хромосоме 17 и представляет собой протоонкоген.

В норме HER2 экспрессируется на многих клетках организма, в том числе на эпителии молочной железы. Но при HER2-позитивном раке молочной железы выявляется гиперэкспрессия рецептора/протеина HER2 из-за амплификации (увеличения количества копий) гена ERBB2. Такую гиперэкспрессию определяют при помощи иммуногистохимического метода на мембране клетки, а амплификацию гена можно выявить генетическим методом, например, in situ гибридизация (метод FISH). В 95% случаев гиперэкспрессия маркера HER2 сочетается с амплификацией ERBB2, в 5% случаев наличие гиперэкспрессии обусловлено другими механизмами.

Результаты иммуногистохимического и генетического исследования обычно коррелируют между собой, а иммуногистохимического метода в большинстве случаев достаточно для определения статуса HER2 при раке молочной железы.

По всем возникшим вопросам Вы можете проконсультироваться у нашего медицинского администратора по телефону: 8-800-555-92-67 или написать нам в WhatsApp: +7 925 740 05 87

Клиническое значение

Амплификация HER2 при раке молочной железы встречается примерно в 15% случаев и имеет важное клиническое значение — течение таких опухолей более агрессивное, а прогноз хуже чем при HER2-негативных опухолях. Но самое важное, что позитивные опухоли хорошо поддаются химиотерапевтическому лечению. Расположение рецепторов HER2 на поверхности клеток создает благоприятные условия для атаки химиопрепаратов. Для терапии чаще всего используются препараты на основе HER2-специфичных моноклональных антител (например, трастузумаб).

Перед проведением терапии моноклональными антителами к HER2 очень важно определить действительно ли в опухоли есть амплификация гена. Чаще всего для этого применяется иммуногистохимический метод исследования, а необходимым условием является сохранение антигенных свойств материала — в случае нарушенных антигенных свойств провести достоверное исследование не получится и пациент может не получить важной терапии. Для достижения оптимальной сохранности рецепторов необходима своевременная фиксация препарата опухоли в 10% нейтральном забуференном формалине на протяжении не менее 6 часов (желательная продолжительность не более 72 часов перед проведением исследования, время фиксации зависит от размера исследуемого образца).

Варианты клонов

Существует большое количество разных наборов для определения HER2 и клонов маркера. Нельзя однозначно рекомендовать какой-то один клон — важное значение имеет соблюдение методики исследования в каждой отдельной лаборатории. Даже при наличии самого лучшего маркера нарушение методики приведет к ложному результату. Сравнительные характеристики клонов приведены в таблице ниже (по материалам https://www.nordiqc.org).

Интерпретация результатов анализов

Для интерпретации результата иммуногистохимического окрашивания существуют разработанные рекомендации. В настоящее время большую популярность имеет руководство по оценке от коллегии американских патологов. Результат иммуногистохимического окрашивания делится на четыре степени по баллам: 0, 1, 2, 3, оценка проводится путем световой микроскопии врачом-патологоанатомом с опытом диагностики рака молочной железы.

Возможные варианты оценки:

0 баллов (это негативный результат) — полное отсутствие окрашивания клеток опухоли или крайне слабое и малозаметное окрашивание менее 10 % клеток опухоли.

1 балл (негативный результат) — неполное мембранное слабо заметное окрашивание более 10 % клеток опухоли. Большая часть карцином молочной железы демонстрируют негативный результат (0 или 1 балл).

2 балла (неопределенный или сомнительный результат) — слабое и умеренное полное мембранное окрашивание более 10 % клеток опухоли или выраженное полное мембранное окрашивание менее 10 % клеток опухоли. Встречается примерно в 25% случаев рака молочной железы. Все случаи с сомнительным результатом должны быть подвергнуты дополнительному исследованию HER2 генетическими методами исследования, например, методом in situ гибридизации (метод FISH). В последующей оценке генетического исследования следует учитывать возможную гетерогенность опухоли, когда одни участки опухоли демонстрируют гиперэкспрессию, а другие нет.

3 балла (позитивный результат) — полное выраженное мембранное окрашивание более 10% клеток опухоли. Результат в 3 балла, как правило, легко заметить на малом увеличение микроскопа в виде крупного участка опухоли с выраженной гомогенное экспрессией. Под полным окрашиванием подразумевается непрерывное окрашивание мембраны без пропусков. Выраженное окрашивание — толстый слой красителя на мембране, иногда его называют “проволочная сетка”. Позитивный результат встречается примерно в 15 % рака молочной железы. Чаще результат выражен одинаково по всему объему опухоли, однако, в ряде случаев встречается фокально гиперэкспрессия в разных участках опухоли, в таких случаях патологоанатом должен оценить объем гиперэкспрессии — если она занимает более 10% опухолевой ткани результат считается позитивным. В ряде случаев сопутствующая карцинома in situ демонстрирует гиперэкспрессию, однако, инвазивный рак может быть негативен в маркеру. Гиперэкспрессия HER2 возможна как в первичной опухоли, так и в метастазах.

Причины получения ложных результатов

Ложно негативные результаты иммуногистохимического исследования возможны по следующим причинам:
— длительное нахождение опухоли без фиксации в формалине
— опухолевая гетерогенность, например, исследован только малый фрагмент опухоли, в котором отсутствует амплификация, но в соседнем фрагменте, который не попал в биоптат, реакция может быть позитивной
— нарушение методики исследования или плохое качество используемого маркера

Ложно позитивные результаты возможны при:
— краевых артефактах окрашивания, когда выявлена выраженная реакция по периферии образца, но крайне слабая или негативная реакция в центральной части — в таких случаях нельзя оценивать периферическую реакцию как однозначно позитивную и лучше выполнить исследование заново
— цитоплазматическая экспрессия без достоверной мембранной экспрессии
— избыточное окрашивание образца из-за нарушения протокола исследования
— оценка результата по раку in situ, а не по инвазивному раку.

Как избежать ошибочного результата?

Для того, чтобы патолог при оценке иммуногистохимического исследования был уверен в результате желательно использовать внешний контроль в виде фрагмента рака с заведомо известным HER2-позитивным статусом в 3 балла. Этот контроль помещают на то же стекло, на котором расположен исследуемый образец опухоли пациента.
В случаях когда результат исследования не вызывает доверия у патолога, рекомендуется повторное определение HER2-статуса. Если результат оказался негативным на биопсийном материале, но ткани опухоли в биопсии крайне мало, то следует повторить исследование на операционном материале. Также повтор исследования на операционном материале желательно выполнить для низкодифференцированных карцином и для всех сомнительных результатов.

Источник

HER2: известные данные о роли рецептора фактора роста в онкогенезе и новые технологии направленной на него терапии

Одной из наиболее серьезных проблем онкологии настоящего времени является высокая распространенность рака молочной железы. Поверхностным маркером такой опухоли зачастую является HER2 — рецептор фактора роста, о котором и пойдет речь в данном материале.

HER2 (human epidermal growth factor receptor 2, человеческий рецептор эпидермального фактора роста 2 типа) представляет собой гликопротеиновый рецептор, ассоциированный с поверхностью мембран клеток эпителиального и мезенхимального происхождения. HER2 относится к семейству рецепторов тирозинкиназ, которое включает 4 подтипа белков: HER1 или EGFR, HER2, HER3 и HER4 [1]. Активация рецепторов этого семейства обычно протекает после связывания с соответствующими лигандами. Однако HER2 на поверхности клетки постоянно находится в активной конформации, образуя гомодимеры или гетеродимеры с другими рецепторами своего семейства [2].

Рисунок 1 ❘ Типичное строение мономерного HER2 с внеклеточным, трансмембранным и внутриклеточным доменами.

В норме HER2 необходим для нормального развития молочных желез, в большом количестве присутствует на поверхности недифференцированных клеток эмбриона. Кроме того, HER2 был обнаружен в тканях почек, сердца, органов желудочно-кишечного тракта. Основным физиологическим эффектом этого рецептора является запуск клеточной пролиферации и подавление апоптоза [3]. В негативных условиях именно это действие HER2 становится основой развития многих злокачественных новообразований.

Структура HER2 кодируется протоонкогеном ERBB2, в структуре которого в случае развития опухоли зачастую обнаруживаются соматические мутации. Мутации могут влиять на строение как внеклеточного, так и трансмембранного участка HER2. При наличии таких измененных доменов сигнальные пути, поддерживающие опухолевый рост, функционируют даже в том случае, если в организме присутствуют нормальные копии гена данного рецептора [2]. Тип мутаций в гене ERBB2 определяет степень чувствительности опухоли к действию терапевтических агентов. Наибольшее число мутаций в гене HER2 обнаружено при нейроэндокринных опухолях предстательной железы, раке мочевого пузыря и плоскоклеточных карциномах. Кроме того, участие гена HER2 в онкогенезе доказано на примере его амплификации, обнаруживаемой при опухолях молочных желез и гастроэзофагеальных новообразованиях. Частота встречаемости мутаций и амплификаций ERBB2 в опухолях различного типа неодинакова.

Рисунок 2 ❘ Частота встречаемости мутаций и амплификаций гена HER2 при различных опухолях.

Прогностические данные в отношении опухолей, связанных с мутацией и амплификацией гена HER2, также различаются. При раке молочной железы отмечен меньший процент выживаемости пациентов, опухоль которых была вызвана мутацией гена. В случае немелкоклеточного рака легкого такой взаимосвязи выявлено не было. Для других распространенных опухолей подобная корреляция также не отмечалась, либо данные исследований неоднозначны [3].

Повышение выработки HER2 отмечается в 20 % случаев рака молочной железы и является негативным прогностическим фактором. Агрессивность роста и инвазии HER2-положительных опухолей связана с функционированием его как рецептора фактора роста, активирующего сигнальные пути, которые запускают рост и дифференцировку клеток, а также подавляют апоптоз. Кроме того, HER2-положительные опухоли часто являются малодифференцированными и имеют большую вероятность метастазирования в регионарные лимфоузлы и отдаленные органы [4].

Количество HER2 на поверхностях опухолевых клеток значительно, что позволяет достоверно отличать нормальные клетки от злокачественно измененных, используя методы иммуногистохимии и FISH. Кроме того, мутации в гене ERBB2 определяются современными методами генетических исследований, о чем было рассказано в материале про наследственные опухолевые синдромы (https://medach.pro/post/1858).

Современные технологии позволяют использовать для лечения HER2-позитивных опухолей высокоэффективные препараты таргетной терапии, внедрение которых существенно повлияло на общую выживаемость пациентов. Особенностью строения HER2 является крайняя стабильность эпитопов внеклеточных доменов, что позволяет эффективно исследовать и тестировать средства таргетной терапии. Такие препараты разрабатываются на основе моноклональных антител, ингибиторов малых молекул и препаратов-конъюгатов.

Наиболее распространены препараты моноклональных антител (например, трастузумаб), которые имеют двойной эффект: с одной стороны, они связываются с юкстамембранным и димеризационным доменами HER2, прекращая их активность, с другой стороны, обладают прямым цитотоксическим эффектом. Ингибиторы малых молекул (такие, как лапатиниб) снижают внутриклеточную каталитическую активность, прекращая таким образом функционирование сигнальных путей, ассоциированных с ростом опухолевой клетки. Препараты-конъюгаты имеют множественное действие в отношении опухолей и в настоящее время показывают более высокую эффективность в сравнении с изолированным применением препаратов моноклональных антител [5].

Рисунок 3 ❘ Принцип действия препаратов моноклональных антител, активных в отношении HER2.

Важным аспектом таргетной терапии HER2-позитивных новообразований является выработка резистентности опухолей к препаратам моноклональных антител. Снижение эффективности таких препаратов наблюдается у пациентов с крайне высокой концентрацией рецептора на поверхности опухолевых клеток. Резистентность к трастузумабу в настоящее время отмечается у 60 % пациентов и реализуется несколькими путями, например, путем снижения синтеза внеклеточных доменов HER2 в опухолевых клетках. В тканях подобных опухолей отмечается накопление карбоксилированных внутриклеточных доменов HER2, которые в будущем могут стать предикторами резистентности опухоли к трастузумабу [6]. Еще одним механизмом, связанным с формированием резистентности опухоли к препаратам таргетной терапии против HER2, является эпителиально-мезенхимальный переход [2]. Подобная тенденция требует поиска новых стратегий лечения. Так, показали себя эффективными комбинации HER2-направленных агентов и двойных блокаторов HER2. В сравнении с трастузумабом более эффективными оказываются препараты биспецифичных антител (например, эртумаксомаб) [7]. Несомненно, разработки в этой области должны продолжаться. Главной целью исследовательской работы в направлении изучения HER2 становится снижение смертности пациентов от рака молочной железы, опухолей легких и желудка, а также улучшение долгосрочных прогнозов при лечении таких новообразований.

Источники

Источник

ОЦЕНКА МУТАЦИОННОГО СТАТУСА ГЕНА HER2/NEU В КЛЕТКАХ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Проанализированы литературные данные и результаты собственных наблюдений в отношении оценки мутационного статуса гена Her2/neu у больных раком молочной железы. Обсуждается алгоритм обследования этих пациентов с использованием иммуногистохимического исследования и флуоресцентной гибридизации in situ.

Ген Her2/neu, расположенный на длинном плече хромосомы 17 (17q12–q21), кодирует трансмембранный протеин массой 185 кДа с выраженной тирозинкиназной активностью [1, 20]. Белковый продукт гена относится к семейству рецепторов эпидермального фактора роста, вовлеченных в активацию сигнальных путей регуляции нормального роста и развития ткани молочной железы [5, 7, 38]. Гиперэкспрессия протоонкогена Her2/neu является распространенным генетическим нарушением при раке молочной железы (РМЖ) [3]. В ранних работах аномалия этого гена выявлена у 30% больных [26, 27]; в последующих исследованиях, более корректных в отношении включения пациентов, частота гиперэкспрессии Her2/neuустановлена на уровне 20% [17, 39].

Гиперэкспрессия Her2/neu относится к важным прогностическим маркерам и предопределяет более частое рецидивирование, снижение показателя выживаемости у больных с впервыевыявленным РМЖ. Данные о статусе рецептора Her2/neu могут помочь принять оптимальное решение при выборе схем адъювантной терапии и прогнозировать эффективность противоопухолевых препаратов различных классов. Пациенты с повышенной экспрессией Her2/neu характеризуются худшим ответом на гормональную [6, 25] и цитостатическую терапию, не включающую антрациклиновые антибиотики [16, 21, 30]. В то же время таксаны, наряду с антрациклинами, демонстрируют хорошую эффективность как при первичном, так и метастатическом Her2/neu-позитивном РМЖ [13, 21, 30, 33].

С введением в клиническую практику трастузумаба (Герцептина) — высокоэффективного специфического гуманизированного моноклонального антитела (МкАТ) против Her2/neu, корректная оценка статуса этого рецептора стала ключевым моментом в принятии решения о тактике лечения пациента с РМЖ. Назначение трастузумаба как в виде монотерапии, так и в комбинации с другими противоопухолевыми агентами, сопровождается повышением уровня ответа, удлинением интервала до прогрессирования заболевания и улучшением общей выживаемости при лечении пациентов с метастатическим Her2/neu-позитивным раком[28]. Результаты проспективных рандомизированных клинических исследований продемонстрировали, что трастузумаб на 1 / 2 снижает риск рецидивирования и на 1 / 3 — смертность больных с РМЖ ранних стадий [12, 19, 24]. Однако терапия трастузумабом не лишена недостатков. Во-первых, это значительная стоимость препарата при необходимости длительной терапии. Во вторых, лечение трастузумабом ассоциируется с риском кардиотоксичности. Риск не столь значителен, однако в ряде случаев приводит к развитию таких серьезных осложнений, как застойная сердечная недостаточность [10, 29]. Все вместе взятое, а именно ожидаемая при Her2/neu-позитивном РМЖ высокая эффективность трастузумаба, существенная стоимость и потенциаль-

ная кардиотоксичность препарата, требует корректной оценки статуса рецептора Her2/neu. Поэтому Американское общество клинической онкологии в 2001 г. рекомендовало оценку статуса Her2/neu в качестве рутинной диагностической процедуры для всех пациентов с РМЖ [2]. В подавляющем большинстве случаев (до 90%) причиной гиперэкспрессии белка является амплификация гена Her2/neu [23]. Усиленная вследствие амплификации гена экспрессия соответствующего белка на поверхности опухолевой клетки предопределяет специфичность терапии трастузумабом.

Существует целый ряд методов, позволяющих прогнозировать эффективность лечения трастузумабом. Так как трастузумаб специфично связывается с белком Her2/neu, оценка этой молекулы предоставляет информацию о целесообразности назначения препарата тому или иному пациенту. Уровень экспрессии белка Her2/neu можно определись с помощью Вестерн-блоттинга, методов иммунного окрашивания in situ, в частности иммунофлуоресцентного (ИФ) и иммуногистохимии (ИГХ). ИГХ метод нашел широкое применение в связи с тем, что повседневно используется для оценки экспрессии многих других протеинов и может быть выполнен на срезах парафиновых блоков ткани, фиксированной формалином. Согласно консенсуса американских патологов и управления по контролю за пищевыми продуктами и лекарственными средствами США (FDA) [37] система оценки результатов ИГХ-исследования экспрессии Her2/neu включает 4 категории (0, 1+, 2+, 3+); результат является позитивным— 3+, если более 30% клеток инвазивной опухоли демонстрируют равномерное окрашивание мембраны. Принесомненных достоинствах ИГХ-метода, а именно легкой воспроизводимости и относительной дешевизне, он имеет и недостатки. Возможны ложнопозитивные результаты, обусловленные техническим несовершенством метода. Кроме того, гиперэкспрессия протеина может быть и несвязанной с амплификацией гена Her2/neu. Возможны и ложноотрицательные результаты теста. В некоторых случаях, после заливки в парафин, ткани РМЖ, характеризующиеся амплификацией гена Her2/neu и гиперэкспрессией соответствующего белка, могут терять рецепторы на поверхности мембраны и утрачивать способность давать специфическое окрашивание при проведении ИГХ-исследования [27].

Значительно более надежным методом выявления амплификации гена Her2/neu является флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) — золотой стандарт в диагностике Her2/neu-позитивных РМЖ [15, 37]. Все большее количество клиник использует его в рутинной практике. Метод позволяет оценить количество копий гена в клетке, а более совершенный его вариант — определить количество хромосом 17. Именно этот вариант выбран для данной работы. Считается, что результат теста является положительным, если соотношение среднего количества копий гена Her2/neu и среднего числа центромер хромосомы 17 в клетке превышает 2,2 [37].

При должной стандартизации методик данные ИГХ-исследования как при Her2/neu-негативном (категории 0 и 1+), так и Her2/neu-позитивном РМЖ (категория 3+) подтверждаются результатами FISH. В лаборатории LabCorp соответствие результатов двух методовотмечалиу 82% проанализированных пациентов; амплификацию гена определяли в 4,2, 6,7 и 89,3% случаев, относящихся к гистохимическим категориям 0, 1+ и 3+ соответственно [4, 28, 34]. У 4% больных Her2/neu-позитивность по результатам ИГХ-исследования (категория 3+) не подтвердилась результатами FISH [22]. Приемлемой для стандартизованной лаборатории считается 5% частота ложнонегативных результатов. Лабораториям рекомендуется проводить параллельную оценку статуса Her2/neuсиспользованием ИГХ-метода и FISH до тех пор, пока у менее 5% больных, относящихсяподанным ИГХ-исследования к категории 0/1+, результаты окажутся позитивными при проведении FISH-теста [40].

Большую проблему составляют случаи РМЖ, относящиеся к категории сомнительных по данным ИГХ-исследования. В 15% случаев 10 и более процентов клеток инвазивного рака демонстрируют полное, однако неравномерное окрашивание мембран очевидного радиального характера. Очень редко отмечают вариант интенсивного окрашивания всей мембраны в 30 и менее процентах опухолевых клеток. Эти паттерны относят к категории 2+. Результаты крупных многоцентровых исследований продемонстрировали, что только в части случаев (от 12 до 24%), относящихся к категории 2+, при проведении FISH выявляют амплификацию гена и они являются в действительности Her2/neu-позитивными [4, 18, 28, 34].

Диагностический поиск амплификации гена Her2/neu еще более усложнен из-за частой выявляемости при РМЖ полисомии хромосомы 17 [31, 35]. До 35% случаев заболевания характеризуются полисомией хромосомы 17 низкой степени и 8% — высокой [8, 15]. Полисомия сопровождается соответствующим увеличением количества копий генов, расположенных на хромосоме, и, как правило, — повышенной экспрессией кодируемых белков. При проведении ИГХ-оценки статуса Her2/neu это часто приводит к ложнопозитивной интерпретации результатов теста.

В данной работе авторы провели в ряде случаев РМЖ параллельную оценку статуса Her2/neu — определяли гиперэкспрессию белка Her2/neu с помощью ИГХ-метода, а амплификацию гена Her2/neu — с помощью FISH. Для иммуногистохимического окрашивания использовали набор Herceptest производства

«Dako» (Дания), для FISH — набор PathVysion производства«Vysis»(США) согласно инструкциям фирмизготовителей. Сопоставление результатов двух методов оценкистатуса Her2/neu продемонстрировало высокую сопоставимость данных ИГХи FISH-методов в отношениислучаев РМЖкатегории 0, 1+ и 3+(рисунок а, б) и подтвердило необходимость обязательного использования FISH для подтверждения Her2/neu-позитивности убольных, относящихся по данным исследования ИГХ к категории 2+. По нашим данным у меньше 25% пациентов с РМЖ отмечают полисомию хромосомы 17, в большом количестве случаев не сопровождающуюся амплификацией гена Her2/neu (см. рисунок в). Чаще отмечали полисомию низкой степени, согласно критериям S. Wang и соавторов [35], со средним количествомхромосом 17 убольныхс аномалией, составлявшим 3,3 наклетку. Результаты исследований подтверждают, что ИГХ 3+-клетки РМЖ могут не характеризоваться амплификацией гена Her2/neu; гиперэкспрессия протеина в такой ситуации может быть обусловлена полисомией хромосомы 17. При сомнительном результате ИГХ-исследования, соответствующем категории 2+, полисомия хромосомы 17 также весьма вероятна. В этой связи закономерен вопрос, насколько полисомия 17 является причиной несоответствия результатов ИГХи FISH-методов определения амплификаций гена Her2/neu. Y. Ма и соавторы [15] при анализе результатов обследования пациентов без амплификации гена Her2/neu выявили существенно более высокую частоту полисомии хромосомы 17 в группе ИГХ 3+ пациентов, чем в группе ИГХ 0/1+/2+. D. Varshney и соавторы [32] отмечали у больных с РМЖ без амплификации гена Her2/neu полисомию 17 в 4% ИГХ 2+ случаев и в 5,5% — ИГХ 0/1+, в 47% — ИГХ 3+. Данные свидетельствуют, что полисомия 17 чаще о бусловливает значительную гиперэкспрессию белка Her2/neu. Увеличение количества хромосом 17 в клетках опухоли безамплификации гена Her2/neu статистически значимо коррелирует с ложной позитивностью ИГХ 3+ случаев РМЖ [14].

Рисунок. Результаты оценки мутационного статуса Her2/neu у больных с РМЖ методом ИГХ (слева, × 200) и флуоресцентной гибридизации in situ (справа, × 1000, зеленые сигналы соответствуют центромерам хромосомы 17, оранжевые — копиям гена Her2/neu): а — ИГХ 1+ случай без амплификации гена Her2/neu; б — ИГХ 3+ случай с амплификацией гена Her2/neu; в — ИГХ 2+ случай без амплификации гена Her2/neu с полисомией хромосомы 17

Полисомия хромосомы 17 — важный клинический маркер, а ее наличие ассоциируется с метастатичесим поражением лимфатических узлов [11] и рядом других факторов неблагоприятного прогноза [36]. Однако более важным и актуальным до настоящего времени является вопрос, будет ли эффективной терапия трастузумабом у больных с полисомией хромосомы 17? По мнению некоторых исследователей, полисомия 17, не сопровождающаяся значительным увеличением количества копий Her2/neu, как в случае амплификации гена, не приводит к достаточному для целенаправленной терапии моноклональным антителом повышению уровня экспрессии белка Her2/neu [35]. Однако большинство авторов полагают [15, 36], что при гиперэкспрессии белка Her2/neu пациентов с полисомией хромосомы 17 следует лечить трастузумабом даже при отсутствии его амплификации. Ожидаемые результаты проспективных клинических исследований дадут окончательный ответ на этот вопрос.

В отношении диагностики данные авторских на-

блюдений и результаты, опубликованные во множестве работ, свидетельствуют о необходимости чрезвычайной деликатности в интерпретации результатов определения гиперэкспрессии Her2/neu, что обусловлено частым несоответствием данных ИГХи FISH-методов, а также вероятностью полисомии хромосомы 17. Большинство исследователей

[37] считают целесообразным проведение анализа экспрессии Her2/neu по консенсусному алгоритму. На первом этапе проводится скрининг с использованием ИГХ-метода: ИГХ 3+ случаи рассматривают как позитивные, ИГХ 0/1+ — как негативные. В отношении ИГХ 2+ случаев проводится повторное тестирование с использованием метода FISH, позволяющего оценить количество копий гена Her2/neu и хромосомы 17. В некоторых странах, таких как Бельгия и Финляндия, для повышения точности результатов повторному тестированию с помощью FISH подвергают все случаи, относящиеся к ИГХ-категориям 2+ и 3+. Группа канадских исследователей рекомендует использовать FISH для анализа ИГХ 2+ больных и всех других случаев, в которых может быть заподозрена Her2/neu-позитивность [9]. Рациональным подходом, который может быть использован в Украине, является тестирование с помощью FISH-метода случаев РМЖ, относящихся по данным ИГХ-исследованиям к категории 2+, и всех пациентов, которым планируется назначение терапии с включением трастузумаба.

Источник