Что такое отжиг днк

Что такое полимеразная цепная реакция и как она работает?

ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) составляет основу бесчисленных исследований с участием живых организмов. Из кода ДНК мы можем определить генетическую основу заболеваний, разработать лекарства, провести судебно-медицинскую экспертизу, идентифицировать микробы и многое другое.

Самое главное, что нужно для такого исследования, — это большое количество исследуемого фрагмента ДНК. Однако ДНК, выделенной из клеток, тканей или любого другого биологического источника, часто бывает недостаточно для анализа. Таким образом, ученым нужно делать больше копий ДНК.

Именно здесь и проявляется решающая роль «полимеразной цепной реакции».

Что такое полимеразная цепная реакция?

ПЦР использует способность ферментов полимеразы создавать копии генетического материала в лабораторных условиях.

До появления ПЦР копии ДНК создавались путем выделения определенного фрагмента ДНК и вставки его в геном живых клеток. Живые клетки реплицировали вставленную ДНК, одновременно реплицируя свою собственную ДНК. Этот метод был трудоемким и длительным способом получения копий ДНК, достаточных для дальнейшего изучения.

Однако теперь это уже не так. Основная заслуга в этом принадлежит Кэри Маллису, который в 1983 году изобрел «полимеразную цепную реакцию» (ПЦР), положив начало «биотехнологической революции». Сегодня ПЦР является очень распространенной лабораторной техникой даже в небольших лабораториях и используется для создания копий ДНК на регулярной основе.

ПЦР может избирательно создавать копии интересующей ДНК посредством процесса, часто называемого «молекулярным фотокопированием». После синтеза нескольких копий ДНК с помощью ПЦР ДНК подвергается «амплификации».

Каковы компоненты реакции ПЦР?

Ключевыми компонентами реакции ПЦР являются матричная ДНК, праймеры, нуклеотиды и термостойкая ДНК-полимераза. Давайте кратко узнаем о каждом из этих компонентов.

Для ПЦР можно использовать ДНК от простейших бактерий до самых сложных животных и растений. Однако вся ДНК (шаблонная ДНК) не проходит ПЦР; в ходе процесса будет амплифицирована только небольшая часть.

Нуклеотиды, используемые для реакции ПЦР, представляют собой смесь всех четырех азотистых оснований, обнаруженных в ДНК. Это аденин (A), тимин (T), гуанин (G) и цитозин (C).

ДНК-полимераза, используемая в ПЦР, представляет собой термостабильную ДНК-полимеразу (часто называемую полимеразой Taq), выделенную из термофильных организмов, способных выдерживать высокие температуры.

Каковы этапы реакции ПЦР?

Активность полимеразы зависит от наличия одноцепочечной ДНК, с которой могут связываться праймеры. Этого можно добиться, нагрев образец ДНК при температуре 94-98 °C.

На следующем этапе праймеры связываются (отжигаются) с шаблонной ДНК в определенных местах. Прямой праймер связывается с началом шаблонной ДНК (одна нить двухцепочечной ДНК) на 3 п.н. нуклеотидной последовательности ATG (стартовый кодон). Обратный праймер связывается с концом комплементарной ДНК (второй нити двухцепочечной ДНК) на 3 п.н. нуклеотидных последовательностей TAG, TAA или TGA (стоп-кодоны). ДНК между стартовым и стоп-кодонами амплифицируется.

Успех этого этапа зависит от последовательности праймеров и температуры, выбранной для отжига, обычно 50-65 °C.

Последним и завершающим этапом является элонгация или терминация, которая происходит при 72 °C, оптимальной температуре для активности Taq-полимеразы. ДНК-полимераза распознает связанный с праймером участок ДНК и добавляет нуклеотиды, комплементарные нити шаблонной ДНК. Это происходит до тех пор, пока она не встретит второй праймер.

После успешной реакции терминации вместо одной спирали ДНК, использовавшейся на начальном этапе, образуются две спирали ДНК. В каждой из двух спиралей ДНК одна нить будет исходной нитью, полученной из образца ДНК. Другая нить будет комплементарной нитью, синтезированной ДНК-полимеразой в ходе ПЦР.

В чем заключается принцип амплификации ДНК с помощью ПЦР?

Этапы денатурации, отжига и полимеризации составляют один цикл ПЦР. Типичная реакция ПЦР может потребовать 25-35 циклов для оптимальной амплификации ДНК.

В конце одного цикла из одного шаблона ДНК образуются две молекулы ДНК. В конце двух циклов две ДНК образуют четыре молекулы ДНК, которые затем амплифицируются до восьми молекул ДНК в конце трех циклов. В конце n циклов будет 2n копий исходного шаблона ДНК.

После каждого цикла количество молекул ДНК, которые могут служить шаблонами для следующего цикла, увеличивается экспоненциально. Это увеличение числа шаблонов цикл за циклом является основой амплификации молекул ДНК в ПЦР.

Экспоненциальная амплификация молекул ДНК с помощью метода ПЦР

Каковы плюсы и минусы ПЦР?

Основные плюсы метода ПЦР заключаются в том, что он способен создавать миллионы и миллиарды копий ДНК всего за несколько часов. Этот метод быстр, относительно прост в освоении и может быть выполнен в базовых лабораторных условиях.

Основным недостатком является высокая чувствительность метода, поэтому образец, используемый для амплификации, должен быть свободен от загрязнений. Даже небольшие следы нежелательной ДНК могут амплифицироваться вместе с интересующей ДНК, что дает ложные результаты.

Другим недостатком является требование информации о последовательности ДНК для разработки праймеров. Кроме того, праймеры могут иногда отжигать не на тех участках ДНК. Такой неспецифический отжиг праймеров может привести к амплификации неправильного фрагмента ДНК.

В редких случаях ДНК-полимераза может включить неправильное основание, что приведет к изменению последовательности интересующей ДНК, что может повлиять на последующий процесс.

Для успешного проведения реакции ПЦР необходимо иметь чистый генетический материал, соответствующий набор праймеров и подходящую температуру отжига.

Где можно использовать эту технологию?

Он составляет основу большинства приложений, связанных с молекулярной биологией, клонированием генов, технологией рекомбинантной ДНК и мутагенезом.

Практическое развитие простой и универсальной техники ПЦР, предложенной Кэри Маллис, радикально изменило биологические исследования. Все, что нам нужно сделать, это смешать все компоненты ПЦР в соответствующих концентрациях в маленькой пробирке, загрузить ее в ПЦР-машину (термоциклер) и подождать несколько часов. После периода ожидания исследователи получат от миллионов до миллиарда копий интересующей вас ДНК. Разве это не удивительно?

Вот почему ПЦР всегда будет быстрым и надежным методом создания копий ДНК по сравнению с методами, использовавшимися до этого революционного открытия.

Источник

ПЦР-диагностика

Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) – это одно из самых ярких достижений в сфере молекулярной биологии. Метод получил широчайшее распространение в разных областях науки. Благодаря очень высокой специфичности и чувствительности, метод ПЦР применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека.
Для анализа методом ПЦР можно использовать любые биологические материалы, которые содержат нуклеиновые кислоты (молекулу ДНК или РНК).

Принцип ПЦР- исследования

Кому мы обязаны появлением метода ПЦР?

Со слов американского биохимика Керри Мюллиса (Kary Mullis), идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода (ДНК) пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга (Arthur Kornberg), которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества.

Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры. И потом останется просто искать эти участки в диагностическом материале.

В итоге, корпорация CETUS, в которой работал Мюлис, выделила ему команду ученых. И в 1985 году, в издании Американского общества генетики человека, появилась публикация с теоретическим обоснованием ПЦР, как метода идентификации генетического материала живых организмов.

Как это все происходит в лаборатории

Выделение ДНК

Элонгация

Или синтез. После завершения процесса отжига, в реакционной смеси создают условия для активности полимеразы. Фермент, ориентируясь на молекулы праймеров (а не исходных нуклеиновых кислот), начинает синтез новых ниток ДНК/РНК. Которые становятся копиями исходных, искомых молекул нуклеиновых кислот.
Такой температурный цикл проводится 30 и более раз. В результате, даже при изначально небольшом количестве искомого генетического материала, в реакционной смеси накапливается значительное число «помеченных» праймерами нуклеиновых кислот (растет экспоненциально, с удвоением при каждом цикле).Обнаружить большие количества ДНК/РНК намного проще, за счет чего реализуется еще одно преимущество ПЦР – высочайшая чувствительность.

Детекция

Оценка результатов ПЦР проводится несколькими путями:

Преимущества методики ПЦР

Всего разработано более 10 разных методик амплификации, применяемых лабораториями в зависимости от исходных условий и поставленных целей.
Общим для них есть высокая чувствительность (для положительного результата достаточно 40 (!) или менее искомых копий ДНК в 1 мл образца, то есть вероятность ложноотрицательного ответа ничтожно мала. И очень высокая специфичность: вероятность ложноположительного ответа составляет менее 1%.
Но точность результатов сильно зависит от качества сбора диагностического материала, тщательного соблюдения всех технических требований к каждому этапу и качеству оборудования, расходных материалов (буфера, праймеров, раствора для отмывки и т.д.).

Области применения в медицине

В дерматовенерологии ПЦР используют для выявления венерических заболеваний: микоплазменной, хламидийной инфекций, сифилиса, генитального герпеса и др.
Инфекционисты активно используют ПЦР для диагностики туберкулеза, ВИЧ, вирусных гепатитов, герпеса, мононуклеоза, вируса Эпштейн-Барр и др.). А с помощью ПЦР в реальном времени, оценивая вирусную нагрузку, врачи могут составить мнение о динамике заболевания, отклике на лечение, что особенно актуально для пациентов с ВИЧ, принимающих терапию.
Также благодаря ПЦР врачи могут в течение нескольких дней с уверенностью идентифицировать коклюш и паракоклюш, выявить возбудителей эпидемии ОРВИ. Уточняются типы вируса гриппа, циркулирующие на определенной территории, на основании чего появляется возможность разработать эффективную вакцину для каждого сезона гриппа.
В течение суток или быстрее можно установить вид возбудителя кишечной инфекции, а значит – назначить адекватное лечение и обнаружить вероятный источник заражения.
Летом, ПЦР актуальна для диагностики заболеваний, передаваемых иксодовыми клещами: боррелиоза (болезни Лайма), клещевых энцефалитов.
Метод позволяет работать с любым биологическим материалом. Гемотрансмиссивные инфекции (сифилис, ВИЧ, гепатиты, боррелиоз) исследуются по пробе венозной крови или спинномозговой жидкости. Кожные болезни (герпес, грибки) – по соскобу с пораженного участка. Венерические и урологические – по образцу мочи, спермы, влагалищного отделяемого.
Так что в медицине, ПЦР применяется везде, где нужна высокая точность и быстрота получения результатов.

Лабораторные исследования, выполняющиеся методом ПЦР:

Источник

СОДЕРЖАНИЕ

Концепции

Гибридизация

Денатурация

Процесс денатурации ДНК можно использовать для анализа некоторых аспектов ДНК. Поскольку соединение оснований цитозина / гуанина обычно сильнее, чем соединение оснований аденина / тимина, количество цитозина и гуанина в геноме (так называемое « содержание GC ») можно оценить путем измерения температуры, при которой тает геномная ДНК. Более высокие температуры связаны с высоким содержанием GC.

Методы анализа ДНК, основанные на температуре плавления, имеют недостаток в том, что они являются прокси для изучения лежащей в основе последовательности; Секвенирование ДНК обычно считается более точным методом.

Отжиг

Штабелирование

Стабильность при плавлении стопок пар оснований (B ДНК)

Шаг	Плавка ΔG ° 37 (Ккал / моль)
TA	-0,12
TG или CA	-0,78
CG	-1,44
AG или CT	-1,29
AA или TT	-1,04
В	-1,27
GA или TC	-1,66
CC или GG	-1,97
AC или GT	-2,04
GC	-2,70

Термодинамика модели двух состояний

Термины Δ H ° и Δ S ° обычно используются для ассоциации, а не для реакции диссоциации (см., Например, метод ближайшего соседа). Затем эта формула превращается в:

В предыдущем абзаце показано, как температура плавления и термодинамические параметры (Δ G ° или Δ H ° и Δ S °) связаны друг с другом. Наблюдая за температурами плавления, можно экспериментально определить термодинамические параметры. И наоборот, что важно для приложений, когда термодинамические параметры данной последовательности нуклеиновой кислоты известны, температура плавления может быть предсказана. Оказывается, для олигонуклеотидов эти параметры могут быть хорошо аппроксимированы моделью ближайшего соседа.

Метод ближайшего соседа

Взаимодействие между основаниями на разных нитях в некоторой степени зависит от соседних оснований. Вместо того, чтобы рассматривать спираль ДНК как последовательность взаимодействий между парами оснований, модель ближайшего соседа рассматривает спираль ДНК как последовательность взаимодействий между «соседними» парами оснований. Так, например, показанная ниже ДНК имеет взаимодействия ближайших соседей, обозначенных стрелками.

Свободная энергия образования этой ДНК из отдельных цепей, Δ G °, представлена ​​(при 37 ° C) как

Δ G ° ₃₇ (прогноз) = Δ G ° ₃₇ (начало C / G) + Δ G ° ₃₇ (CG / GC) + Δ G ° ₃₇ (GT / CA) + Δ G ° ₃₇ (TT / AA) + Δ G ° ₃₇ (TG / AC) + Δ G ° ₃₇ (GA / CT) + Δ G ° ₃₇ ( _запуск A / T)

За исключением члена инициирования C / G, первый член представляет свободную энергию первой пары оснований, CG, в отсутствие ближайшего соседа. Второй член включает как свободную энергию образования второй пары оснований, GC, так и стэкинг-взаимодействие между этой парой оснований и предыдущей парой оснований. Остальные термины определены аналогично. В общем, свободная энергия образования дуплекса нуклеиновой кислоты равна

Каждый член Δ G ° имеет энтальпийный Δ H ° и энтропийный Δ S ° параметры, поэтому изменение свободной энергии также определяется выражением

Параметры, связанные с десятью группами соседей, показанными в таблице 1, определяют по температурам плавления коротких олигонуклеотидных дуплексов. Любопытно, что только восемь из десяти групп независимы.

Модель ближайшего соседа может быть расширена за пределы пар Уотсона-Крика, чтобы включить параметры для взаимодействий между несовпадениями и соседними парами оснований. Это позволяет оценивать термодинамические параметры последовательностей, содержащих изолированные несоответствия, например, например (стрелки, указывающие несоответствие)

Эти параметры были подобраны из экспериментов по плавлению, и расширение таблицы 1, которая включает несоответствия, можно найти в литературе.

Более реалистичным способом моделирования поведения нуклеиновых кислот могло бы быть использование параметров, которые зависят от соседних групп по обе стороны от нуклеотида, что дает таблицу с такими записями, как «TCG / AGC». Однако это будет включать около 32 групп для пар Уотсона-Крика и даже больше для последовательностей, содержащих несовпадения; количество экспериментов по плавлению ДНК, необходимых для получения надежных данных для такого большого количества групп, было бы слишком большим. Однако существуют и другие средства для доступа к термодинамическим параметрам нуклеиновых кислот: технология микроматриц позволяет проводить гибридизационный мониторинг десятков тысяч последовательностей параллельно. Эти данные в сочетании с теорией молекулярной адсорбции позволяют определить многие термодинамические параметры в одном эксперименте и выйти за рамки модели ближайшего соседа. В целом предсказания метода ближайшего соседа достаточно хорошо согласуются с экспериментальными результатами, но некоторые неожиданные выпадающие последовательности, требующие дальнейших исследований, действительно существуют. Наконец, мы должны также упомянуть повышенную точность, обеспечиваемую анализами разархивирования одной молекулы, которые позволяют по-новому взглянуть на термодинамику гибридизации ДНК, а также на достоверность модели ближайшего соседа.

Источник

ПЦР это аббревиатура для обозначения полимеразной цепной реакции, которая является основным методом молекулярной биологии.

По существу, основной целью полимеразной цепной реакции является быстрое увеличение количества копий определенных участков ДНК.

Продукт ПЦР выступает в качестве средства для дальнейшего анализа. Например, амплификат используется в гель-электрофорезе для обнаружения различных последовательностей ДНК.

Сегодня различные виды ПЦР, в сочетании с другими технологиями, находят многочисленные приложения в таких областях, как судебная медицина, сельскохозяйственные науки, медицина и т. д. Метод полимеразной цепной реакции используется для диагностики заболеваний, клонирования и секвенирования генов.

ПЦР-амплификацию можно проводить с использованием ДНК из различных источников. Это очень чувствительный метод и для получения количества копий достаточного для обычного лабораторного анализа требует только следовых количеств ДНК.

ПЦР повышает количество фрагментов матричной ДНК

3 основные стадии ПЦР амплификации ДНК

Полимеразная цепная реакция представляет собой трехстадийный циклический процесс, состоящий из определенных этапов, различающихся между собой по времени проведения и температуре.

3 основных этапа ПЦР включают:

Каждый из этих шагов повторяется 30-40 раз (циклов).

В течение каждого цикла реакционная смесь подвергается воздействию трех разных температур.

Температурный профиль 3 основных стадий ПЦР

Во время последовательных циклов основных этапов ПЦР (денатурация, отжиг и элонгация) все новосинтезированные нити ДНК будут действовать как шаблоны, вызывая экспоненциальное увеличение количества производимой ДНК.

Каждый цикл удваивает количество молекул ДНК (ампликонов), синтезируемых из ДНК шаблона.

Этап ПЦР денатурации

Первым из трех стадий ПЦР является этап денатурации.

Во время стадии денатурации водородные связи, которые удерживают вместе две нити двухцепочечной ДНК, разрушаются, и эти нити расходятся друг от друга.

Этот процесс высвобождает одноцепочечную ДНК, которая выступает в качестве ДНК матрицы на этапе элонгации.

Температура денатурации устанавливается выше 90°C (обычно 94°C). Продолжительность этой стадии может доходить до одной минуты (обычно 30 секунд).

Этап ПЦР отжига

На стадии отжига праймеры выстраиваются на одноцепочечных нуклеотидных последовательностях ДНК-мишени в соответствии с правилами спаривания оснований.

Это обыкновенная зависящая от температуры реакция ДНК : ДНК гибридизации которая нуждается в оптимизации.

Это единственная стадия ПЦР амплификации ДНК температура которой может варьировать в широких пределах.

Температура этой стадии зависит от точной последовательности и длины праймеров.

Обычно реакционную ПЦР смесь охлаждают до 40-60°С.

Тем не менее, температуры отжига для ДНК-шаблонов с высоким содержанием GC пар могут достигать 72°C (нормальная температура этапа элонгации).

Температура для этой стадии ПЦР выбирается для оптимального связывания праймеров с подходящим шаблоном ДНК и зависит от температуры плавления праймеров.

Неудачно подобранная температура отжига может приводить к появлению ложных продуктов реакции или вообще не давать результатов.

Так как праймеры относительно короткие и находятся при высоких молярных концентрациях продолжительность стадии отжига составляет около 30 секунд.

На этой стадии отожженные олигонуклеотиды обеспечивают свободную 3′-гидроксильную группу для Taq ДНК-полимеразы и действуют как праймеры для синтеза ДНК.

Этап ПЦР элонгации (синтеза).

Последний из 3 основных этапов ПЦР является шагом элонгации или синтеза.

Это стадия ДНК проводится термостабильной ДНК-полимеразой.

Температуру стадии элонгации обычно устанавливают на 72°C. Она немного ниже оптимальной для Taq ДНК-полимеразы.

Taq-полимераза синтезирует комплементарные нити ДНК, начиная с праймеров.

Скорость синтеза составляет примерно 1000 пар оснований в минуту.

Поэтому для амплификации ДНК-шаблона, который имеет длину 500 оснований, при нормальных условиях время этапа ПЦР элонгации должно составлять не менее 30 секунд.

Обычно для синтеза каждых 500 пар оснований ДНК матрицы требуется 30 секунд.

Циклы ПЦР амплификации

В течение самого первого цикла полимеразной цепной реакции единственными шаблонами, доступными для отжига праймеров, являются участки исходной ДНК, полученной из соответствующего источника.

Поскольку исходный ДНК шаблон во много раз превышает длину требуемого ампликона, полимеризация первого цикла будет продолжаться до тех пор, пока она не будет прервана на стадии денатурации второго цикла ПЦР.

В конце первого цикла полимеразной цепной реакции на каждую двухцепочечную ДНК, с которой началась реакция, приходится две новых молекулы двухцепочечной ДНК.

Эти продукты полимеразной цепной реакции образуют ДНК-шаблоны, которые ограничены только на одном конце (semi-bounded DNAs).

Во втором цикле как исходные мишени ДНК, так и ограниченные на одном конце ДНК будут служить в качестве шаблонов.

Исходные ДНК-шаблоны будут продолжать производить ограниченные на одном конце ДНК в каждом цикле ПЦР реакции.

В каждом последующем цикле исходные шаблоны ДНК, ограниченные на одном конце ДНК и ампликоны будут служить в качестве шаблонов для праймеров ПЦР.

В реакционной смеси ПЦР:

В конце 35 циклов ПЦР на каждую исходную последовательность ДНК-шаблона приходиться более 34 миллиардов копий ДНК-ампликонов.

Разработка программируемого термоциклера помогла расапространению ПЦР технологии.

Программируемый термоциклер основан на металлических нагревательных блоках с отверстиями для пробирок и предназначен для переключения между запрограммированной последовательностью температур ПЦР шагов.

Источник

Сущность ПЦР и циклы синтеза ДНК

В современной медицине интенсивно применяются новые технологии для диагностики и лечения заболеваний. Для выявления возбудителей инфекции в последние годы в дополнение к традиционным микробиологическим и иммунологическим исследованиям все более широко используются методы молекулярной биологии.

В настоящее время амплификация нуклеиновых кислот полимеразной цепной реакцией (ПЦР) достаточно широко распространена в практической медицине. Данный метод незаменим в следующих случаях:

В основе полимеразной цепной реакции лежит достраивание ДНК-матрицы по принципу комплементарности с помощью фермента ДНК-полимеразы, что носит название репликации или амплификации.

In vivo она включает несколько стадий:

Открытие у бактерий Thermis aguatis термостабильной ДНК-полимеразы, которая действует при температуре 70-72 °С, позволило осуществить репликацию ДНК in vitro и сделать процесс циклическим. При многократном повторении циклов репликации происходит увеличение числа копий фрагмента ДНК. Все это позволяет из единичных клеток микроорганизмов, содержащихся в анализируемом биологическом материале, получить необходимое количество ДНК для их идентификации. Чувствительность метода составляет 0,5-1 бактерия или вирусная частица на пробу.

Каждый цикл синтеза (амплификации) состоит из 3-х этапов, протекающих в различных температурных режимах.

При его разработке требуется найти фрагмент молекулы ДНК, который бы отличался генетической консервативностью и присутствовал только у интересующего нас вида микроорганизмов, при этом длина фрагмента должна составлять примерно 20 нуклеотидов.

Поскольку наращивание дочерних нитей ДНК может идти одновременно на обеих цепях материнской ДНК, то для работы ДНК-полимеразы на второй цепи тоже требуется свой праймер. Таким образом, в реакционную смесь вносятся два праймера. Фактически праймеры, присоединившись к противоположным цепям молекулы ДНК, ограничивают собой тот ее участок, который будет в дальнейшем многократно удвоен или амплифицирован. Такие фрагменты ДНК называются ампликонами. Длина ампликона может составлять несколько сот нуклеотидов. Меняя пару праймеров, мы можем переходить от анализа одного возбудителя к анализу другого.

Если в растворе не окажется ни одной молекулы ДНК с участком, комплементарным внесенным праймерам, даже несмотря на то, что в растворе будет плавать миллион других молекул ДНК, реакция полимеразной цепной реакции не произойдет.

В случае диагностики некоторых инфекций, например, вирусного гепатита В, С, D, необходимо большее число ампликонов, а значит, и циклов (40-45).

Весь технологический процесс с использованием полимеразной цепной реакции осуществляется в виде трех основных процедур: пробоподготовка клинических образцов; проведение самой полимеразной реакции, направленной на умножение (амплификацию) фрагментов ДНК биологического возбудителя; детекция продукта ПЦР, т.е. оценка результата.

Результаты ПЦР анализируют с использованием метода иммуноферментного анализа, электрофореза в плоском агаровом геле. Его окрашивают бромистым этидием, и полосы анализируют с последующим фотографированием. При этом расстояние пробега полосы исследуемой пробы, соответствующее таковому в положительном контроле, свидетельствует о синтезе фрагмента ДНК возбудителя.

=================
Вы читаете тему:
Полимеразная цепная реакция. Сущность метода, его преимущества и возможности.

Костюк С. А. БелМАПО.
Опубликовано: «Медицинская панорама» № 9, ноябрь 2003.

Источник