что такое стеклышки в онкологии
Обязанность врача — не только лечить, но и объяснить
Основное заблуждение о профессии патолога — вскрывает трупы. На самом деле врач-патологоанатом — один из главных участников в лечении заболеваний. В том числе — онкологических. О роли патолога в постановке диагноза и лечении, а также о том, что должен знать о нем пациент, рассказывает Владимир Кушнарев, выпускник Высшей школы онкологии, врач-патологоанатом НМИЦ онкологии им. Н. Н. Петрова.
Введение в матчасть
У врача-патологоанатома три основные задачи:
Взаимодействие патолога с другими врачами и/или пациентом невозможно без двух вещей — микропрепарата и парафинового блока. Вместо объемных и, откровенно говоря, ненужных пациенту определений из медицинских справочников, предлагаю просто посмотреть на фото:
 |
Стеклопрепарат, или — как его любят называть пациенты — стеклышко
 |
Парафиновые блоки. Если очень грубо, это кусочки удаленной ткани, залитые в парафин. Каждый кусочек соответствует своему параметру. Сколько блоков — столько и стеклышек должно быть «на руках»
Зачем они нужны? Представьте: вот перед нами почка, а на ней — опухоль. В зависимости от ее размеров, хирург решает, отрезать часть с опухолью, либо удалить орган целиком. После операции хирург передает материал патологу, чтобы тот оценил, что это за опухоль правильно ли ее удалили.
Для этого кусок удаленной ткани делят на маленькие кусочки. Эти манипуляции называются (не пугайтесь) вырезкой. Затем их фиксируют в формалине для сохранения ткани (грубо говоря консервируют, чтобы ткань не испортилась). Далее эти маленькие — размером до 2 см — кусочки помещаются в парафин, изготавливая парафиновый блок. Таких блоков может быть как 6, так и 100 — все зависит от сложности и количества исследований, которые проводит патолог.
После материал парафинового блока режут на специальном устройстве (микротоме), а потом окрашивают специальными красителями (обычно это гематоксилин и эозин) и смотрят на них под микроскопом.
Что важно, мы никогда не разрешаем хирургу прикасаться к органу после удаления без присутствия патологоанатома. Потому что это может повлиять на результаты исследований. Иногда — даже на стадирование заболевания.
С чем сталкивается патолог
Патологоанатом получает очень много препаратов на пересмотр, второе мнение и проведение дополнительных тестов и т. д. При этом часто пациенты приносят только стеклопрепараты. Если пациент не принес парафиновый блок, мы не можем сделать дополнительный тест и приготовить новый микропрепарат. Иногда материал в парафиновом блоке оказывается плохого качества, и сделать мы уже мало что можем. Результат всегда один — пациент теряет драгоценное время. Если учитывать, что второе мнение требуется, как правило, при неблагоприятном прогнозе, для нас важен каждый день
Вторая проблема — дефицит информации. Яркий пример: недавно нам пациент принес препарат с диагнозом «желудок». Не нужно быть врачом, чтобы понимать, желудок — орган, а не диагноз. Была ли у этого пациента терапия? Какая у него история болезни? Кто его лечил ранее и к кому мы можем обратиться за дополнительной информацией? Неизвестно. Патолог должен контактировать и с лечащим врачом, и с пациентом. Только так рождается истина.
 |
Вы, возможно, удивитесь, но патолог должен разбираться и в хирургии, и в химиотерапии. Он должен понимать, как проходила операция (чтобы оценить края резекции, т. е. безопасность операции) и что последует за его диагнозом (какую схему лечения выберет онколог).
Каждый гистологический подтип ведет к определенной схеме химиотерапии. Например, опухоль щитовидной железы: фолликулярная аденома и анапластическая карцинома — два разных подтипа, которые лечатся и наблюдаются совершенно по-разному. То же самое и с другими опухолями.
Кроме того, существуют специальные молекулярно-генетические и иммуногистохимические тесты, которые помогают выбрать оптимальную схему химиотерапии, и врач-патологоанатом здесь — главный участник.
Диалог без посредников
С патологом можно и нужно разговаривать напрямую: просить объяснить непонятные значения, задать дополнительные вопросы и попросить пересмотреть препараты… Как четвертую задачу патолога можно выделить второе мнение. И здесь давайте определимся, к кому целесообразно за ним обращаться.
В идеале, когда диагностика и лечение онкологических заболеваний — комплекс мероприятий, сосредоточенных в одном медицинском учреждении. Причем в том, которое обладает достаточным опытом. Например, если я знаю, что медицинский центр им. Дмитрия Рогачева работает с детской гематологей, онкологией и иммунологией, и он — условно — считается лучшим в этих направлениях по России, я обращусь туда. Потому что я знаю, что в этом центре со мной — с пациентом — будет работать сообща большая команда специалистов — это мультидисциплинарный подход. Например, частные центры не всегда могут себе это позволить.
Вне зависимости от того, какой врач перед вами, важно не бояться и прямо говорить, что именно вам нужно объяснить. Обязанность врача — не только качественно лечить, но и успокоить пациента и объяснить ему, что с ним происходит.
Что такое гистологические блоки и стёкла?
Что такое гистологический блок?
Для гистологических и цитологических исследований тканей или клеток под микроскопом, необходим материал, который получают при проведении биопсии. Образцы ткани опухоли или подозрительного участка из организма пациента, обрабатывают специальным образом, чтобы обеспечить сохранность тканей и клеточных структур. После подготовки образцы заливают парафином.
В парафиновых блоках ткань может храниться очень долго, при соблюдении правильного режима. Блоки можно использовать для проведения повторных исследований. Выглядят блоки, как показано на фото.
Что такое гистологическое стекло?
Материал, сохранений в гистологическом блоке еще не готов для изучения под микроскопом. Для этого часть образца из гистологического блока нарезают, окрашивают, что позволяет выявить структуру ткани и размещают на предметном стекле. После накрывают покровным стеклом.
Тонкие окрашенные пластинки образцов тканей, с двух сторон защищенные стеклами и называются гистологическими стеклами.
Именно в стёклах материал исследуют под микроскопом.
Хранение гистологических блоков и стекол
После проведения морфологического исследования гистологические материалы не выбрасывают. Они поступают на хранение в архив онкологического диспансера. Блоки, на основании которых был поставлен онкологический диагноз, хранятся пожизненно (ранее, взятые до 1999 г. и при СССР блоки хранились 25 лет). Блоки, на основании которых был поставлен доброкачественный диагноз, хранятся в течение 5 лет. Они хранятся при температуре от +10 до +25°C вне холодильника в сухом помещении, в тёмном месте (коробке, футляре). Стёкла в лабораториях сохраняются лишь при наличии онкологической патологии, тоже пожизненно.
Мнение эксперта MedService
Важно! При выезде на обследование или лечение в Южную Корею иметь при себе именно блок!
В парафиновом блоке хранится образец ткани в первоначальном виде, каким его взяли при биопсии, можно сказать оригинал.
Это даёт возможность повторно исследовать образец.
Стекла уже покрашены определенным красителем и их можно только посмотреть под микроскопом, их нельзя покрасить другими красителями, например теми которые применяются в других странах, соответственно нельзя сделать на их основе повторный анализ.
Как проводится гистологическое исследование: виды, методы, особенности
Злокачественные новообразования — это группа заболеваний, насчитывающая несколько тысяч видов опухолей разных типов и разной степени злокачественности. Они подразделяются на большие группы в зависимости от того из каких тканей они развиваются: если из эпителиальных (барьерных) — то это раки, если из соединительных тканей (мягких тканей и костей) – саркомы, если из лимфоидных (иммунных) – лимфомы/лейкозы. От того насколько правильно верифицирована опухоль (определен ее тип, степень злокачественности и другие характеристики) зависит правильность и эффективность лечения. Важную роль в этом играют гистологические исследования.
О том, как проходят гистологические исследования, какие задачи кроме диагностических они позволяют решать, что влияет на сроки их выполнения рассказывает заведующая патологоанатомическим отделением с прозектурой НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, к.м.н. Анна Сергеевна Артемьева.
Что служит материалом для патоморфологических (гистологических) исследований?
Процесс получения фрагмента ткани (биоптата) — биопсия – это несколько разных способов забора материала для гистологического исследования.
Биопсию внутренних органов делают под УЗИ-навигацией, либо с помощью хирургического вмешательства.
Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?
1 Этап. Фиксация — «консервирование» биоптата в формалине — специальном химическом растворе, который предотвращает гниение, позволяет сохранить структуры ткани.
Фиксация биоптата может занимать от 6 до 24 часов – в зависимости от его вида и размера.
Операционный материал фиксируется дольше, в несколько этапов. Сначала предварительная фиксация, которая занимает примерно 12 часов. Затем вырезка нужных фрагментов и повторная фиксация еще 24 часа.
Соотношение объема материала к объему формалина должно быть 1:20.
2 Этап. Процессинг — процесс обезвоживания, обезжиривания и пропитки материала парафином. Автомат перемещает кусочек материала из раствора в раствор.
В качестве растворов применяются: абсолютированный изопропиловый спирт (6-8 смен), ксилол (2 смены), расплавленный парафин (2 смены).
Программа разнится для «жирного» материала (к которым относятся, например, ткани молочной железы) и «нежирного» – 36 и 24 часа соответственно.
Процесс получения парафиновых блоков.
3 Этап. Изготовление парафинового блока. Кусок материала помещается в форму с расплавленным парафином (уже другим нежели во время процессинга – с более высокой температурой плавления) и охлаждается. Выполняется вручную, сложно ускорить.
4 Этап. Изготовление срезов. Толщина образца — кусочка ткани, залитого в парафин – 1-3 мм. Толщина каждого среза 4-5 мкм (0,004-0,005 мм). Выполняет лаборант с использованием специального инструмента – микротома.
Срезы монтируются на стекла и должны высохнуть.
Несмотря на то, что часть материала теряется при выравнивании в микротоме, при должном профессионализме, из одного образца — материала от одной биопсии, операционного материала от одной опухоли, возможно изготовить около 100 стекол (микропрепаратов).
Для чего делаются срезы?
Срезы делаются для рутинной окраски гематоксилинном и эозином, иммуногистохимического исследования и других видов исследований.
Срезы для всех исследований используются одинаковые, различается окраска, могут отличаться стекла, на которые они монтируются, так для ИГХ и FISH нужны специальные адгезивные стекла или заряженные стекла.
Блоки и стекла способны храниться долгие годы и использоваться для проведения дополнительных гистологических исследований, пересмотров, а также в научных целях.
Архив гистологических материалов собирается в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова с 1927 года и содержит более 10 млн единиц хранения (микропрепараты — стекла, парафиновые блоки, архивные карточки, влажный архив).
Какие виды гистологических исследований наиболее информативны?
Что позволяют определить разные виды гистологических исследований
Гистологическое исследование – что это такое?
Позволяет верифицировать опухоль – то есть определить из каких клеток она состоит (из какой ткани она развивается), степень ее дифференцировки (зрелости).
Рутинная окраска, выполняющаяся при гистологическом исследовании, позволяет выявить патологический процесс в анализируемом материале (биоптате, операционном материале):
Также, в большинстве случаев, благодаря рутинной окраске, можно определить степень злокачественности опухоли и, если она достаточно зрелая, то какова ее природа.
Окрашенные срезы под микроскопом
 |
Инвазивный протоковый рак er 100%.
Карцинома сигмовидной кишки.
Крупноклеточная нейроэндокринная опухоль.
МТС крупноклеточной нейроэндокринной опухоли.
Неспецифический рак молочной железы. Участок in situ карциномы внутри протока, криброзного типа.
Низкодифферинцированный рак пищевода.
При гистологическом исследовании биоптата и операционного материала можно оценить распространенность: размер опухоли и прорастание в окружающие ткани, насколько затронуты лимфоузлы и есть ли метастазы в отдаленные органы (если эти все структуры присланы для гистологического исследования). При консультации готовых микропрепаратов – стекол, это, как правило, невозможно, если опухоль больше размеров гистологической кассеты или рассечена предыдущим исследователем и не предоставлены данные макроскопического исследования.
Во время гистологического исследования изучаются все стекла от одного образца – материала, полученного от одного вмешательства — одной операции или одной биопсии, вне зависимости от их количества, это считается одной консультацией.
Сроки выполнения гистологического исследования зависят от количества микропрепаратов и от категории сложности того процесса, который в них обнаруживается, сроки могут удлиняться, особенно при необходимости использования дополнительных методов исследования и анализа дополнительных сведений. На сроки выполнения гистологического исследования влияет полнота предоставленной пациентом клинической информации, в том числе данных уже проведенных исследований.
Иммуногистохимия (ИГХ)
Сложное многоэтапное исследование, выполняется после гистологического исследования на том же материале. Опухолевые срезы окрашиваются антителами, которые способны связываться антигенами (белками), которые несут опухолевые клетки. Разные опухолевые клетки несут разные антигены, к каждому из которых подобно ключа к замку подходит антитело.
Один из этапов ИГХ
ИГХ исследование — это комбинаторика. 100% специфичных и чувствительных к какой-то опухоли маркеров не существует, но есть набор антигенов, которые в определенном типе опухоль должны быть и набор тех, которых там быть не должно, таким образом ИГХ-панель строится так чтобы включать несколько антител, которые должны быть позитивны и несколько, которые должны быть негативны. Для разных опухолей различаются эти наборы позитивных/негативных маркеров.
При проведении прогностической ИГХ – выявлении маркеров чувствительности к терапии определяется набор таких маркеров для конкретных опухолей, например, рака молочной железы: рецепторы стероидных гормонов (эстроген, прогестерон), рецептор эпидермального фактора роста (HER2) и индекс пролиферативной активности Ki67 (скорости деления клеток).
Стекла окрашиваются последовательно — различными антителами красятся наборы маркеров в несколько этапов, процесс окраски стекол одним антителом занимает 48 часов.
Таким образом, каждое антитело наносится на отдельный срез ткани, монтированный на отдельное стекло, как правило с соответствующим внешним контролем, количество реакций (используемых антител) и этапов окраски может существенно варьировать в зависимости от конкретной диагностической ситуации, все зависит от индивидуальных особенностей опухоли. Проводится такое количество окрасок, которое необходимо для того, чтобы выявить наиболее характерный для определенной опухоли набор позитивных и негативных маркеров.
Кому-то для этого будет достаточно 5 антител, а кому-то необходимо сделать 20 окрасок и более. Максимальное количество окрасок, которое нам приходилось делать – 212.
Поэтому точные сроки и стоимость этого исследования невозможно определить заранее. Разные по течению и прогнозу опухоли могут быть очень похожи друг на друга, только минимальные различия в окрашивании, с учетом клинических данных и данных других методов обследования, могут позволить установить верный диагноз.
Есть целый ряд доброкачественных опухолей, симулирующих злокачественные, в том числе высокоагрессивные, а некоторые злокачественные высоко дифференцированные опухоли трудно отличить от воспалительных и реактивных процессов. В таких ситуациях только опыт и квалификация патоморфолога, анализ всего комплекса доступной информации (снимки КТ, МРТ, рентген, протокол операции, и др.) позволяют поставить диагноз.
В грамотной интерпретации результатов ИГХ очень важна роль эксперта, ведь те случаи, с которыми приходится работать, в большинстве своем, сложные. Практически не существует антител, которые могут выступать в качестве 100%-х маркеров той или иной опухоли, врачу всегда приходится взвешивать различные вероятности.
Что определяется с помощью ИГХ?
Иммуногистохимия позволяет оценить потенциальный темп роста опухоли, ответ на химио-, таргетную, гормональную терапию.
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH-тест)
Это метод молекулярно-генетической диагностики в ткани.
FISH проводится в срезе ткани и позволяет привязать генетическую перестройку к конкретной опухолевой клетке.
В этом тесте также используются специальные красители, которые связываются только с определенными участками хромосом. Их называют зондами, которые могут быть помечены флуоресцентным или хромогенным красителем, визуализирующимися при помощи флуоресцентного или светового микроскопа.
Технические операции по подготовке гистологических стекол к этому исследованию занимает 2 рабочих дня.
Анализ препарата с помощью многоголового микроскопа.
Полученные микропрепараты очень чувствительны к внешней среде – они могут выцвести со временем, чтобы избежать потерь информации все FISH-препараты сканируются, создается их цифровая копия, которая доступна для внешнего пересмотра. Специалисты просматривают флуоресцирующий материал в темном поле, в анализе препарата принимают участие как минимум 2 специалиста. При необходимости используется и цифровой анализ.
Что определяется с помощью FISH-теста?
FISH-тест позволят диагностировать некоторые виды опухолей, определяет целесообразность использования некоторых химиотерапевтических препаратов.
Проведение гистологического исследования, и в первую очередь FISH-теста — это экспертная работа, которая зависит от квалификации специалиста. Очень многие мутации, которые выявляются в опухолях, не всегда являются метками опухолей, они могут находиться и в доброкачественных образованиях или нормальных тканях.
За год патологоанатомическое отделение НМИЦ онкологии имени Н.Н. Петрова выполняет около 20000 гистологических исследований (пациентов), из них около 5000 консультативных случаев (пересмотров), более 30000 ИГХ исследований, а также участвует в программе внешнего контроля качества ИГХ исследований NordIQ.
Специалисты отделения обладают огромным опытом проведения гистологических исследований и экспертными компетенциями.
Скорость выполнения гистологических исследований и адекватность гистологического заключения зависят от ряда факторов:
После выполнения гистологического исследования пациент получает гистологическое заключение/протокол исследования гистологического материала.
Расшифровка гистологического исследования: на что обратить внимание?
Гистологическое заключение включает в себя несколько рубрик (полей):
Макроскопическое описание
Заполняется как для биоптатов — не обязательно, так и для операционного материала, для которого имеет крайне важное значение в ряде случаев.
Микроскопическое описание
Описание изменений на микроскопическом уровне, не обязательно к заполнению, так как вся необходимая информация может быть отражена в поле «заключение».
Результаты иммуногистохимического исследования
В этом поле описано какие антитела использовались в данном случае и каков результат окрашивания: наличие окрашивание или его отсутствие, локализация в клетке при необходимости, а также процент позитивных клеток и интенсивность реакции, когда это имеет значение.
Патологоанатомическое заключение
Содержит нозологическую/классификационную единицу, если ее возможно установить по исследованному материалу, то есть дает ответы на вопросы:
Также приводятся все необходимые прогностические данные: степень дифференцировки, параметры, влияющие на стадию, состояние краев резекции, если возможно их оценить и т.п.
Дополнительные замечания и рекомендации
Поле может содержать комментарии, относительно возможного направления дальнейшего обследования, вероятности того или иного диагноза, необходимости ознакомиться с теми или иными клиническими данными и др.
Мы не рекомендуем пациентам самостоятельно заниматься расшифровкой показателей гистологического исследования, используя информацию, полученную на различных Интернет-сайтах и форумах пациентов, так как на интерпретацию данных влияет большое количество факторов, в том числе, возраст пациента, данные других исследований и др.
Расшифровкой исследования может заниматься только специалист – врач онколог по профилю заболевания!
Авторская публикация:
АРТЕМЬЕВА АННА СЕРГЕЕВНА
заведующий патологоанатомического отделения с прозектурой ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, кандидат медицинских наук
Иммуногистохимические стекла
Иммуногистохимические стекла – это специальным образом подготовленный материал из опухоли пациента, которые непосредственно изучает врач-патолог для постановки диагноза.
Для производства игх стекла необходимо взять у пациента образец опухоли. Такая процедура называется биопсированием, а ее результат – кусочек опухоли – биоптатом. Она может проводиться как амбулаторно под местным обезболиванием, так и в формате операции под общим наркозом. После биопсирования биоптат помещают в контейнер с раствором забуференного формалина и доставляют в патоморфологическую лабораторию. Там над материалом проводится ряд операций для сохранения структуры образца ткани опухоли. Результатам этих операций является гистологический парафиновый блок – он может храниться при соблюдении условий без ограничения срока, его можно будет использовать для проведения анализа даже через несколько лет.
Из парафинового блока выбираются наиболее информативные участки – из них на специальном приборе-микротоме- нарезают тончайшие пластинки ткани и помещают их на стекло. Затем их окрашивают с помощью специальных красителей. Для гистологического исследования применяются стандартные красители (гематоксилин, эозин), для иммуногистохимического – применяются красители, проявляющие в цвете реакцию антиген-антитело, которая лежит в основе иммуногистохимического анализа. Количество стекол у одного пациента может достигать 30. Иммуногистохимия на стеклах позволяет обнаружить те клеточные компоненты, которые не удается увидеть при обычном гистологическом окрашивании.
Затем окрашенные стекла попадают на стол к врачу-патоморфологу, который изучает их под микроскопом и ставит диагноз. Сложные случаи, как правило, должны быть проконсультированы с дополнительными специалистами во избежание ошибки. Это можно сделать как с физической перевозкой стекла иммуногистохимии, так и при работе с отсканированными стеклами в специальной программе. Второй способ является более быстрым, современным и позволяет консультировать иммуногистохимические стекла с несколькими зарубежными специалистами одновременно и в кратчайший срок.