что такое пцр на туберкулез
Что такое пцр на туберкулез
Исследование для выявления возбудителя туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микобактерии в образце биоматериала.
Туберкулез, микобактерии туберкулеза, палочка Коха.
Tuberculosis, Tubercle bacillus, Koch’s bacillus.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Биоптат, венозную кровь, ликвор, мокроту, плевральную жидкость, первую порцию утренней мочи, эякулят.
Общая информация об исследовании
Туберкулез (от лат. tuberculum – «бугорок») – инфекционное заболевание человека и животных, передающееся преимущественно воздушно-капельным путем. Риск заразиться повышает подавление иммунитета, вызванное ВИЧ/СПИДом, диабетом, заболеванием почек, трансплантацией органов и применением иммуносупрессоров, беременностью, старением. Кроме того, наиболее подвержены ему те, кто контактирует с больными туберкулезом, а также дети до 5 лет после виража туберкулиновой пробы. К наиболее уязвимым группам населения относят бездомных, заключенных, мигрантов из стран с высокой заболеваемостью туберкулезом, наркопотребителей, а также пожилых людей.
Для данного исследования используется тест-система, основанная на выявлении геномной ДНК возбудителя туберкулеза с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (реал-тайм ПЦР). В современной диагностике это один из самых быстрых, универсальных и высокочувствительных методов.
Стандартные способы обнаружения микобактерий туберкулеза базируются на выращивании патогенных микроорганизмов в питательной среде. Сложности связаны с низкой скоростью роста колоний Mycobacterium tuberculosis – необходимо ожидать до 1,5 месяцев после взятия материала.
Высокой чувствительностью и специфичностью обладают молекулярно-биологические методы, основанные на детекции генетического материала микобактерий туберкулеза. Их важнейшим преимуществом является высокая скорость получения результата. Использование ПЦР реал-тайм позволяет выявить возбудитель туберкулеза уже в день получения клинического образца.
Бактериемия (попадание в кровь пациента микобактерий) может возникать на ранних стадиях туберкулезной инфекции, а также при развитии генерализованного или внелегочного туберкулеза. Она опасна тем, что иммунный ответ на бактерии вызовет сепсис и септический шок, чреватый смертью. Риск развития генерализованного туберкулеза наиболее высок у пациентов с ВИЧ на поздних стадиях, у тех, кто прервал противотуберкулезную терапию, а также у не обратившихся вовремя за медицинской помощью при появлении симптомов туберкулеза.
Диагностика туберкулеза у ВИЧ-инфицированных затруднена из-за иммуносупрессированного состояния организма, что зачастую проявляется в ложноотрицательных результатах туберкулиновых реакций и микробиологических тестов. В связи с этим тестирование на Mycobacterium tuberculosis методом ПЦР реал-тайм имеет большое значение.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Что может влиять на результат?
Эффективная противотуберкулезная терапия со временем приводит к исчезновению микобактерий в клиническом материале.
Кто назначает исследование?
Врач общей практики, терапевт, фтизиатр, уролог, гинеколог, инфекционист.
Туберкулез: формы, симптомы, диагностика, лечение
Туберкулез – это инфекционное заболевание, вызываемое палочкой Коха (Mycobacterium tuberculosis). Патоген чаще всего поражает легкие, но существуют и другие формы: туберкулез костей, суставов, почек, кожи и других органов.
Процент смертности от туберкулеза по всему миру высок, он входит в десятку заболеваний, приводящих к летальным исходам [1]. Это не только медицинская, но и социальная проблема, поскольку на заболеваемость, помимо состояния здоровья, также влияют социальные и экономические причины, качество питания и образ жизни. Ключевыми факторами риска считаются вредные привычки, ослабленная иммунная система и хронический стресс.
Как передается туберкулез
Возбудитель передается от человека к человеку воздушно-капельным путем при чихании и кашле и просто при разговоре, а также иногда контактно (через поврежденную кожу или внутриутробно). Бактерии туберкулеза долго сохраняются активными во внешней среде в плохо проветриваемом помещении и попадают в организм здорового человека через предметы быта и продукты питания.
Заражение туберкулезом еще не означает начало заболевания: оно развивается только у 5-15% инфицированных. До развития первых симптомов может пройти несколько недель или месяцев, и основным фактором риска считается ослабление иммунных сил организма [1].
Классификация туберкулеза
Симптомы туберкулеза
Признаки заражения различаются в зависимости от органа, пораженного микобактерией. Общие симптомы включают утомляемость, сниженную трудоспособность, плохой аппетит, повышенную температуру тела, потерю веса, появление румянца на щеках.
Клинические признаки туберкулеза у детей развиваются быстрее и более выражены. Риск заражения у этой группы пациентов выше. Это связано с возрастными особенностями строения органов и нестойкостью иммунитета ребенка к агрессивным инфекциям. Помимо «взрослых» симптомов у детей также отмечаются капризность, плаксивость, необоснованная беспокойность и нарушения сна.
Диагностика туберкулеза
Это заболевание, особенно закрытая форма, сложно диагностируется. Переход из латентной фазы в активную смазанный, а клинические симптомы не позволяют установить точный диагноз или отсутствуют. В связи с этим решающее значение имеет лабораторная диагностика.
Проба Манту (или туберкулиновая проба). Для проведения этого классического анализа на туберкулез пациенту подкожно в области предплечья вводят очищенный туберкулин – смесь белков, характерных для микобактерий. Оценку иммунологической реакции проводят через 48-72 часов на основании диаметра папулы (узелка над поверхностью кожи) или участка покраснения в месте введения туберкулина. У людей, неинфицированных бактерией, папулы не образуются или их размеры незначительны. К основным недостаткам метода относятся непереносимость туберкулина и ложноположительная реакция у людей, вакцинированных от туберкулеза вакциной БЦЖ.
Квантифероновый тест на туберкулез. Этот современный иммунологический метод позволяет выявить латентный туберкулез, а также туберкулезное поражение других органов. Введения туберкулина не требуется, поэтому этот тест подходит уязвимым группам пациентов (беременные и кормящие женщины, пожилые люди, ВИЧ-инфицированные, люди с непереносимостью туберкулина). Для диагностики используется венозная кровь. Наличие в организме активного туберкулеза обуславливает появление в крови особых белков, входящих в состав микобактерий. Т-лимфоциты реагируют на присутствие этих белков и в результате такой сенсибилизации начинают усиленно вырабатывать интерферон-гамма. Квантифероновый тест основан на измерении уровня интерферона-гамма, повышение которого указывает на наличие туберкулезной инфекции в пробе крови.
Метод T-SPOT.TB. Позволяет диагностировать латентную и активную формы легочного и внелегочного туберкулеза. Для исследования используют венозную кровь. В основе метода лежит оценка количества самих сенсибилизированных Т-лимфоцитов. Он также не дает ложноположительных результатов и подходит уязвимым группам пациентов.
Анализ мокроты. Для проведения теста необходимо собрать утреннюю мокроту, которая отделяется при кашле. Во взятом образце определяют наличие самих микобактерий. Анализ подходит только для диагностики туберкулеза легких.
Анализ мочи. Выявляют изменения параметров, характерные для туберкулеза: появление лейкоцитов, эритроцитов, бактерий, белка, гноя, сдвиг реакции мочи в кислую сторону.
Отрицательные лабораторные анализы не гарантируют отсутствие туберкулеза. Пациенты с подозрением на заболевание проходят флюорографию и/или рентгенографию легких. Для выявления внелегочных форм туберкулеза проводят МРТ, КТ и другие инструментальные исследования. Также применяют биопсию (взятие образца тканей) для микроскопических исследований и посевов на питательные среды.
Дифференциальную диагностику проводят с широким рядом заболеваний в тех случаях, когда ни одно исследование не подтвердило наличие микобактерий, присутствуют атипичные симптомы или отсутствует адекватный ответ на противотуберкулезное лечение.
Лечение туберкулеза
Полное выздоровление не гарантирует отсутствие рецидива заболевания в будущем.
10 фактов о кашляющих соседях, школьных Манту и туберкулезе, который недолечили
В прошлом году в России выявили более 61 тысячи новых случаев туберкулеза. Как не пополнить эту статистику?
Несмотря на стойкую тенденцию к снижению заболеваемости и смертности, Россия по-прежнему входит в 30-ку стран с наибольшей распространенностью туберкулеза. Призыв врачей регулярно проходить обследование на туберкулез более чем оправдан, и вот 10 фактов тому в подтверждение.
Факт 1: уровень жизни не так важен
Туберкулез долгое время считался болезнью людей с низким уровнем жизни. На почве этого убеждения выросла проблема стигматизации, которую эксперты сейчас называют одной из главных помех в деле борьбы с туберкулезом: страх огласки заставляет многих скрывать диагноз даже ценой отказа от лечения. В реальности уровень жизни уже не влияет на риск заражения палочкой Коха, вызывающей туберкулез. По данным ВОЗ, четверть жителей планеты инфицированы, и далеко не все они находятся за чертой бедности или в местах лишения свободы. Однако социальный статус, по мнению экспертов, может повлиять на вероятность развития туберкулеза и эффективность лечения. Запустить процесс могут плохое питание, например, или стрессы, от которых, впрочем, никто не застрахован. Остро стоит проблема приверженности лечению – больные с низким социальным статусом чаще отказываются от лечения или прерывают его.
Факт 2: достаточно нескольких бактерий
У современного человека, живущего в городе, много шансов познакомиться с туберкулезной палочкой. Сам факт встречи, впрочем, не означает, что туберкулез неизбежен: это может не случиться, потому что иммунная система человека умеет подавлять инфекцию.
Большой процент инфицированности населения микобактериями туберкулеза объясняется в том числе ее устойчивостью к внешним условиям. Например, в уличной пыли они могут жить до 3 месяцев, в домашней — до года, а в тепле, влажности и без солнечного света — больше 5 лет. Туберкулезная палочка комфортно чувствует себя в воде и на любых поверхностях, например, в доме, если там не устраивают генеральных уборок с хлорсодержащими средствами. Больной при этом выделяет микобактерии в окружающую среду совершенно обычными образом – с частичками мокроты. Не обязательно плевать кровью себе под ноги – это будет происходить каждый раз при кашле, чихании и даже разговоре. При тесном контакте в условиях жилья, офиса или закрытого учреждения этого вполне достаточно, и за год больной может заразить в среднем 10-15 человек. Для инфицирования достаточно вдохнуть всего лишь несколько микобактерий.
Факт 3: курение и диабет повышают риск
По статистике, только 10 процентов инфицированных микобактериями людей заболевают в течение жизни. Есть обстоятельства, которые увеличивают вероятность развития туберкулеза. Вот они:
сахарный диабет, язвенная болезнь
длительный прием некоторых препаратов – глюкокортикоидов, цитостатиков, иммунодепрессантов
активное употребление алкоголя
детский и подростковый возраст
тяжелые напряженные условия труда, безработица
Факт 4: некоторые не заболеют, но их немного
В мире живут люди с генетической устойчивостью к микобактериям – их примерно 2 процента. Иммунная система в их случае надежно подавляет рост туберкулезной палочки. Для таких людей риск развития туберкулеза нулевой. В пользу врожденной устойчивости говорит отсутствие рубца после вакцинации и ревакцинации БЦЖ и стабильно отрицательная проба Манту. Хотя в большинстве случаев отсутствие рубца или реакции на пробу Манту все же объясняется тем, что БЦЖ не было, вакцину ввели неправильно или были нарушены условия ее хранения и она просто не подействовала. Также рубец может быть почти незаметным после введения БЦЖ-M (вакцина «щадящей» иммунизации).
Факт 5: кашля может и не быть
Симптомы, которые должны насторожить и стать поводом для обследования на туберкулез, – беспричинное снижение веса, лихорадка, ночная потливость, хронический кашель, не связанный с ОРВИ. В народе сложилось устойчивое мнение, что кашель – основной признак. Сосед кашляет – это подозрительно. Близкий стал кашлять — пора на флюорографию. Никто не кашляет – все в порядке. На самом деле туберкулез, как и многие серьезные болезни, на ранних стадиях не имеет никаких симптомов или перечисленное может присутствовать в легкой форме, не внушающей опасений. Кашель присоединяется, когда нарушается функция легких. Именно поэтому обследование на туберкулез должно проводиться регулярно, а не по требованию.
Факт 6: обследование – это не один анализ
Такой диагноз, как туберкулез, не ставится ни по результатам одной пробы или анализа, ни по заключению одного врача. Это многоэтапный процесс. Вот, например, как все происходит у детей.
До 7 лет включительно делается проба Манту. Для оценки размера папулы нет общих стандартных критериев, она всегда проводится с учетом предыдущих показателей. Если результат меняется с отрицательного на положительный, говорят о том, что произошел вираж пробы. Это не означает, что у ребенка может быть туберкулез. После 8 лет проводится Диаскинтест.
Если проба Манту выходит за рамки нормы, назначают диаскинтест или лабораторные тесты. При отрицательном результате обследование прекращается. При положительном ребенку показан осмотр фтизиатром и дообследование – анализы крови, мочи, по возможности мокроты, а так же компьютерная томография. Цель – исключить или подтвердить активный процесс.
При нормальных результатах КТ проводится терапия латентного туберкулеза – в стационаре или на дому. Если активный туберкулезный процесс подтвержден, случай разбирается специальной врачебной комиссией, которая направляет ребенка на лечение в стационар.
Факт 7: есть предболезнь, которую надо лечить
Латентный туберкулез — это своего рода предболезнь: палочка Коха уже размножается, но человек еще не выделяет ее во внешнюю среду. В таком случае рентген и КТ не показывают туберкулезные очаги в легких, однако исследование крови или внутрикожная проба будут положительными. Проблема в том, что взрослый человек обычно ограничивается флюорографией и в отсутствие других симптомов больше не обследуется. Однако при латентном туберкулезе, несмотря на нормальное самочувствие пациента, врачи назначают превентивную химиотерапию, чтобы не допустить развития болезни.
Факт 8: туберкулез излечим
Туберкулез лечится и излечивается. Курс лечения длится в среднем полгода, применяется сочетание нескольких антибиотиков, через 3 недели после начала терапии больной перестает выделять микобактерии во внешнюю среду. Важен определенный образ жизни – скрупулезное выполнение предписаний врача, богатое белками питание, режим дня, нормальный отдых. Поэтому даже в тех странах, где не практикуется длительное пребывание больного в стационаре, процесс лечения контролирует медицинский работник или волонтер.
Факт 9: тем не менее от него умирают
Несмотря на успехи в лечении туберкулеза, он по-прежнему входит в 10 основных причин смертности на планете – наряду с инсультом, ХОБЛ, диабетом, раком легких и ДТП. Основные причины – поздно выявленная болезнь (без лечения умирают две трети больных), неправильное назначение препаратов или их плохое качество, низкая приверженность лечению у определенных категорий больных, а так же лекарственно-устойчивые формы (МЛУ-ТБ). По статистике ВОЗ, в странах Евросоюза, где ситуация с таким туберкулезом лучше, чем в целом по региону, показатель успешности лечения МЛУ-ТБ не превышает 45 процентов.
Факт 10: нельзя останавливаться
Количество больных, прекративших терапию по собственному желанию, в некоторых регионах РФ достигает 53 процентов. Это одна из причин лекарственно-устойчивого туберкулеза. Почти половина таких случаев в мире приходится на три страны – Индию, Китай и Россию.
Два наиболее эффективных препарата первой линии для лечения туберкулезной инфекции, – рифампицин и изониазид. О лекарственно-устойчивом туберкулезе говорят, когда микобактерии перестают реагировать на один из них или на оба. МЛУ-ТБ может развиться не только на фоне неправильной терапии, устойчивой туберкулезной палочкой можно заразиться. Схемы лечения такого туберкулеза существуют, но они несравнимо дороже, сложнее и длительнее, а прогноз хуже. Кроме того, устойчивость палочки Коха может быть и широкой – то есть распространяться на большее число антибиотиков. По данным ВОЗ, такой туберкулез официально зарегистрирован в 117 странах мира. Зачастую лечить больного с широкой лекарственной устойчивостью оказывается нечем. Именно поэтому крайне важно не только вовремя диагностировать туберкулез, но и правильно пролечить его.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ТАБЛИЦА СКРИНИНГОВЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА
| Реакция Манту | Диаскин тест | Квантифероновый тест | T-SPOT.TB | |
|---|---|---|---|---|
| Метод исследования | Кожный тест | Кожный тест | Анализ крови из вены | Анализ крови из вены |
| Побочные реакции | Возможны | Возможны | Нет | Нет |
| Противопоказания | Есть | Есть | Нет | Нет |
| Оценка результата | Субъективная | Субъективная | Объективная | объективная |
| Ложноположительный результат после БЦЖ | Часто | Отсутствует | Отсутствует | Отсутствует |
| Выявляет стадию туберкулеза | Активную | Активную | Латентную и активную | Латентную и активную |
| Использование при беременности | Запрещено | Запрещено | Разрешено | Разрешено |
Диаскинтест
Внутрикожная проба с аллергеном туберкулезным рекомбинантным. Позволяет определить, происходит ли в организме размножение микобактерий, и обнаружить в том числе латентную туберкулезную инфекцию. Не подходит для выявления лиц, которым нужна ревакцинация БЦЖ, имеет ряд противопоказаний – например, карантин в детских учреждениях, острые инфекционные заболевания или хронические в фазе обострения, аллергические реакции.
T-SPOT.TB
Т-SPOT.ТБ – современный метод иммунологической диагностики латентной туберкулезной инфекции по анализу крови.
МЕТОДИКА T-SPOT ТЕСТ НА ТУБЕРКУЛЕЗ РЕКОМЕНДУЕТСЯ:
Квантифероновый тест
Иммуноферментный тест, выявляет специфический гамма-интерферон для определения туберкулеза. Обладает высокой специфичностью, на результат не влияет наличие прививки БЦЖ, перекрестные реакции, текущее состояние здоровья пациента. Положительный результат означает активный туберкулез или скрыто протекающее заболевание.
Рентгенологические методы
Для диагностики туберкулеза назначается рентгеновский снимок легких (или флюорография для массового скрининга) и компьютерная томография, которые позволяют обнаружить в легких активный туберкулезный процесс. Опасения насчет неинформативности флюорографии или доз облучения, получаемых при регулярном обследовании, не имеют оснований.
T-SPOT.TB: кому и когда нужен
Все существующие тесты можно разделить на две группы – скрининговые и подтверждающие. Главное преимущество первых – дешевизна, скрининговыми обследованиями должно быть охвачено как можно большее количество людей. У взрослых скрининг на туберкулез – это флюорография. Однако она может выявить только очаги в легких, но не носительство инфекции или латентный туберкулез. Детям, которым не показан рентген, делают кожные пробы. Проблема в том, что они часто дают ложноположительный результат. И чтобы избавить впоследствии родителей и ребенка от походов по врачам и необходимости в некоторых случаях все же делать рентгенологическое исследование, можно выполнить исследование крови – например, T-SPOT.TB.
Такой анализ можно рекомендовать не только при положительном результате кожной пробы. Второй случай – когда в принципе невозможно сделать пробу Манту. Дело не только в отказе родителей, бывают медицинские противопоказания. Третья ситуация, когда анализ крови показан – это обследование людей из групп риска: в первую очередь это медперсонал, люди с иммунодефицитными состояниями (ВИЧ, системные заболевания, требующие приема иммунодепрессантов, онкозаболевания и пр.), те, кто был в контакте с больным туберкулезом. В принципе, если не попадающий ни в одну из категорий человек сделал, например, флюорографию, но отрицательный результат его по какой-то причине не удовлетворил (допустим, у него есть настораживающие симптомы), он тоже может прояснить ситуацию с помощью такого теста.
Микобактерии, ДНК (Mycobacterium tuberculosis complex, ПЦР) соскоб, кач. в Москве
Исследование проводят в целях диагностики туберкулеза легких. Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соскобе из зева устанавливают наличие генетического материала Mycobacterium tuberculosis.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ Микобактерии, ДНК (Mycobacterium tuberculosis complex, ПЦР) соскоб, кач.?
Подробное описание исследования
Исследование направлено на диагностику туберкулеза дыхательных путей — мультисистемного заболевания с множеством проявлений, которое является наиболее распространенной причиной смертности от инфекционных заболеваний во всем мире. По данным ВОЗ, в 2015 году было зафиксировано 1,4 млн случаев смерти от туберкулеза, среди которых 0,4 млн человек имели ВИЧ.
Россия входит в число стран с наиболее высоким показателем распространенности туберкулеза, хотя в последние 10 лет в этом направлении наблюдается положительная тенденция: снижается число как новых случаев заражения, так и доля носителей из общего числа больных.
Как правило, данное заболевание поражает легкие (85% случаев), но может затрагивать и другие органы, в том числе кости. Источниками инфицирования являются больные люди с открытой формой заболевания — выделяющие возбудителя в окружающую среду со слюной.
Симптомами заболевания являются:
Если речь идет о легочной форме заболевания, симптомы могут включать:
При внелегочной форме симптомы будут зависеть от области поражения.
Mycobacterium tuberculosis complex — общее название близкородственных бактерий, которые являются возбудителями туберкулеза. Они имеют множество факторов патогенности, которые позволяют им долго выживать в окружающей среде и избегать иммунного ответа. Микобактерия туберкулеза является внтуриклеточным паразитом, тем самым, будучи поглощенной клетками иммунной системы, возбудитель инактивирует ферменты данных клеток, оставаясь жизнеспособной. Благодаря этим свойствам микобактерий туберкулез — достаточно опасное заболевание, особенно для людей с ослабленным иммунитетом. Заражение происходит, как правило, воздушно-капельным путем, когда инфицированный человек чихает или кашляет, в редких случаях для заражения достаточно даже разговора с больным. Также туберкулез может передаться даже от беременной женщины плоду еще в утробе.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — метод исследования, позволяющий обнаружить ДНК возбудителя в биоматериале даже в небольшом количестве. ПЦР на M. Tuberculosis, согласно международным клиническим рекомендациям, не является стандартом диагностики данного заболевания. Данный тест используется в качестве дополнительного. «Золотой стандарт»: Проба Манту, T-SPOT, диаскин или квантифероновый тест.
Найти и заменить: существует ли альтернатива пробе Манту
Автор
Редакторы
Статья на конкурс «био/мол/текст»: Несмотря на стремительное развитие медицины, туберкулез не спешит сдавать свои позиции, оставаясь не только актуальным и смертоносным, но и трудно диагностируемым заболеванием. А ведь своевременная диагностика — это возможность снизить количество больных активными формами и повлиять на распространение инфекции! Традиционно для диагностики туберкулеза применяют пробу Манту 2 ТЕ. Тем не менее в последние годы появились альтернативные методы — «Диаскинтест» и анализ крови IGRA (Interferon Gamma Release Assay). Что это за тесты и в состоянии ли они полностью заменить «старушку» пробу Манту, которой недавно исполнилось 110 лет?
Конкурс «био/мол/текст»-2018
Эта работа опубликована в номинации «Биофармацевтика» конкурса «био/мол/текст»-2018.
Генеральный спонсор конкурса — компания «Диаэм»: крупнейший поставщик оборудования, реагентов и расходных материалов для биологических исследований и производств.
Спонсором приза зрительских симпатий выступил медико-генетический центр Genotek.
Проблема лечения и диагностики туберкулеза до сих пор остается чрезвычайно актуальной. И дело не только в том, что палочка Коха (Mycobacterium tuberculosis) развивает поразительную устойчивость к антибиотикам: ситуацию осложняет еще и длительный инкубационный период заболевания. Фактически, мы имеем дело с возбудителем, носители которого могут долгое время быть совершенно здоровы! В придачу, существуют не только активные формы туберкулеза, но и латентное носительство. А предсказать, перейдет ли оно в активную форму и когда это случится, чрезвычайно трудно. Однако не все так плохо, потому что даже латентное носительство можно диагностировать и в случае необходимости пролечить. Вопрос лишь в том, что до сих пор не разработано точного и эффективного метода диагностики туберкулезных процессов. Поэтому долгие годы ученые пытаются разработать «идеальный» тест, который позволил бы отличить туберкулез от постпрививочного иммунитета и латентного носительства, имел бы низкую себестоимость и не зависел от человеческого фактора.
Тем не менее диагностика — это еще не диагноз, и результат любого теста не является истиной в последней инстанции. Диагноз же по-прежнему ставят, исходя из нескольких составляющих:
Однако большинство этих методов диагностируют туберкулез постфактум — только скрининговые тесты помогают выделить лиц с высоким риском развития заболевания или с только зарождающимся процессом. И уже более 100 лет основным методом массовой диагностики туберкулеза является туберкулиновая проба Манту 2 ТЕ (содержащая 2 туберкулиновые единицы). Тест спорный, со множеством ложноположительных результатов, но именно его используют во всем мире и отказываться пока не собираются.
Проба Манту
Проба Манту 2 ТЕ — это специфический кожный тест на основе туберкулина. Туберкулин является смесью разнообразных антигенов, полученных из инактивированной микобактерии туберкулеза и продуктов ее жизнедеятельности (белков, полисахаридов, нуклеиновых кислот — всего около 200 наименований [1], [2]). Также в состав препарата для пробы Манту входят фенол в качестве консерванта, стабилизатор «Твин-80», соли фосфатного буферного раствора и хлорид натрия.
Смысл этой пробы в том, что организм человека, зараженного микобактерией туберкулеза, будет реагировать на введение ее частичек выработкой Т-лимфоцитов [3]. Если же человек здоров, подобной реакции не будет. Однако тут есть одно но: антигены, входящие в состав туберкулина, характерны не только для палочки Коха, но и для других штаммов микобактерии, в том числе и для M. bovis — основы прививки БЦЖ. Поэтому проба Манту плохо «различает» привитых этой вакциной и реально заболевших туберкулезом.
В мире используют 3 вида туберкулина (рис. 1): датский препарат PPD (purified protein derivative) RT 23, американский PPD-S и российский — PPD-L. Различаются они видами микобактерий, из которых были получены: при производстве датского и американского препаратов используют только M. tuberculosis, а при производстве российского — смесь из M. tuberculosis и M. bovis (микобактерии, вызывающей туберкулез у крупного рогатого скота; на основе этого штамма была разработана вакцина БЦЖ). Различие в составах туберкулина обусловливает разные границы положительного результата: 15 мм для детей, привитых БЦЖ, и не более 10 мм для непривитых детей до 5 лет у датского препарата, не более 10 мм у американского и 5 мм у российского [4].
Рисунок 1. Препараты туберкулина
Диагностику с помощью пробы Манту проводят следующим образом: небольшое количество туберкулина вводят под кожу чуть выше запястья и через 72 часа оценивают реакцию, которую считают положительной, если в месте введения появляется припухлость (папула) более 5 мм в диаметре. В зависимости от ее размера, различают степень реакции от отрицательной (0–1 мм) до резковыраженной, или гиперергической (17 мм и более у детей и подростков, 21 мм и более у взрослых) [5]. И тут начинаются трудности, потому что у привитых БЦЖ реакция Манту положительна [6]! Мало того, чем больше поствакцинальный рубец, тем выше чувствительность к туберкулину [7]. Поэтому у привитых БЦЖ оценивают не только диаметр папулы, но и размер поствакцинального рубчика (табл. 1).
| Срок, прошедший с момента вакцинации БЦЖ | Размер рубчика после БЦЖ | Привитый иммунитет (мм) | Неясная причина | Подозрение на инфицирование |
|---|---|---|---|---|
| 1 год | 6–10 мм | 5–15 мм | 16 мм | Более 17 мм |
| 2–5 мм | 5–11 мм | 12–15 мм | Более 16 мм | |
| 0 мм | 2–4 мм | 5–11 мм | Более 12 мм | |
| 2 года | Вне зависимости от размера | Уменьшение размера папулы или прежний ее размер | Увеличение размера на 2–5 мм от предыдущего положительного результата | Реакция изменяется на положительную или папула увеличивается более чем на 5 мм |
| 3–5 лет | Вне зависимости от размера | 5–8 мм либо уменьшение размера папулы | Увеличение размера на 2–5 мм за последний год или отсутствие тенденции к уменьшению | Изменение на положительную (5 мм) реакцию или увеличение папулы на 6 мм; 12 мм при впервые поставленной пробе; изменение предыдущего размера на 2–4 мм или размер в 12 мм |
| 6–7 лет | Вне зависимости от размера | 0–4 мм | 5 мм | 6 мм и более |
| 7–9 лет | Если в 7 лет ребенку была сделана ревакцинация БЦЖ, реакция Манту вновь становится положительной и нормы повторяются | 0–4 мм | 5 мм | 6 мм и более |
| Взрослые | Отрицательная реакция, покраснение любого диаметра; папула до 4 мм | Более 5 мм |
Безусловно, метод оценки результата довольно субъективный. Но главное, папулу надо еще правильно измерить, зафиксировав только размер выпуклой части и игнорируя покраснение вокруг нее (рис. 2).
Рисунок 2. Правильная и неправильная оценки диаметра папулы
Впрочем, основной недостаток пробы Манту не в этом: проблема в том, что с ее помощью трудно отличить поствакцинальный иммунитет от заболевания, а цена ошибки — «ненужный» курс антибиотиков. Поэтому чаще всего ее результат — это только первый шаг, лишь подозрение на туберкулез. Что интересно, при тяжелом течении болезни из-за неадекватного Т-клеточного ответа реакция на туберкулин обычно отсутствует [6], однако эту фазу заболевания уже хорошо видно и по клинической картине, и на рентгенограмме.
Еще одна трудность с диагностическими возможностями пробы Манту связана с тем, что они зависят от нижней границы положительного результата: чем ниже граница, тем больше будет наблюдаться ложноположительных реакций. К примеру, в России пороговым значением является папула в 5 мм. Это приводит к гипердиагностике — большому количеству зафиксированных реакций, но в итоге к низкому проценту реально выявленных случаев инфицирования [4].
В общем, не удивительно, что в последнее время информативность туберкулиновой пробы постоянно ставится под сомнение. Мало того, она может вызывать не связанные с туберкулезом аллергические реакции, поэтому все больше здоровых, но склонных к аллергии детей вынуждены идти в тубдиспансер в надежде выяснить причину положительной реакции. И наконец, на результат пробы может влиять множество факторов: недавно перенесенные инфекции, хронические заболевания, прием медикаментов, изменение гормонального фона или иммунитет к нетуберкулезным микобактериям [7].
Если говорить о достоинствах пробы Манту, то кроме низкой себестоимости, ими будут возможность выявления туберкулеза на ранних стадиях развития (за исключением лиц с иммуносупрессией и маленьких детей до двух лет [7]) и более высокая диагностическая ценность у непривитых БЦЖ по сравнению с привитыми (от 50% и ниже против 65,4% [6], [9]).
Мифы о пробе Манту
«Диаскинтест»
Наука, однако, не стоит на месте, и альтернативы пробе Манту существуют. Вопрос лишь в том, насколько они альтернативны. После расшифровки в 1998 году генома M. tuberculosis появилась возможность разработать абсолютно новые тесты: отечественную кожную пробу «Диаскинтест» и анализы крови IGRA. Однако на роль теста-заменителя пробы Манту больше всех претендует именно «Диаскинтест».
По сравнению с туберкулиновой пробой «Диаскинтест» — это большой шаг вперед. И все потому, что в его состав входит не сотня антигенов, а только рекомбинантный белок CFP10-ESAT6 в стандартном разведении, который не реагирует ни на вакцинный штамм M. bovis, ни на большинство непатогенных микобактерий, — в основном он чувствителен только к палочке Коха. Иными словами, для диагностики инфекции можно использовать лишь этот белок, который показывает наличие или отсутствие клеточного иммунитета к M. tuberculosis. «Диаскинтест» вводят внутрикожно и проверяют результат через 72 часа.
Рисунок 3. Антигены ESAT-6 и CFP-10
В геноме M. tuberculosis белки ESAT-6 и CFP-10 закодированы в зоне RD1. Они экспрессируются при размножении микобактерии и связаны с ее вирулентностью, поэтому иммунный ответ на эти белки отражает активность инфекционного процесса [10]. В составе «Диаскинтеста» они представлены в виде рекомбинантного белка из двух связанных антигенов ESAT6 и CFP10 (рис. 3), синтезируемых генетически модифицированной культурой бактерий Escherichia coli BL21(DE3)/pCFP-ESAT [6]. По похожей технологии был получен еще один препарат — датский C-Tb, однако в нем другое соотношение ESAT-6 и CFP-10, и он менее чувствителен по сравнению с российской разработкой [4].
Благодаря тому, что в состав «Диаскинтеста» входит не коктейль из полисахаридов, липидов и белков, а только синтетический антиген плюс вспомогательные вещества (фенол, натрия хлорид, «Твин-80»), он является более высокоспецифичным, чем препарат для пробы Манту. То есть при его применении фиксируется меньше ложноположительных результатов, а также аллергических реакций неинфекционного характера [2].
Что касается оценки активности туберкулезного процесса, то в этом «Диаскинтест» на голову опережает конкурентов, потому что для него разработана градация положительного результата (табл. 2). То есть чем больше возбудителя в организме, тем больший размер будет иметь папула. А это значит, что у большинства туберкулезных больных реакция на этот тест более выражена, чем у латентных носителей (единственное, здесь снова имеет место субъективная оценка результата). Прибавим к этому то, что «Диаскинтест» позволяет выявлять носителей с высоким риском развития туберкулеза и снижать количество необоснованной терапии [11], а также снижение выраженности реакции на него у больных, получающих курс антибиотиков [4], и получим весьма ценное конкурентное преимущество перед туберкулиновой пробой.
| Реакция | Размер гиперемии и папулы |
|---|---|
| Отрицательная | Нет папулы и/или гиперемии, «укольчитая реакция» до 2 мм |
| Сомнительная | Наличие гиперемии при отсутствии папулы |
| Положительная: | Папула любого размера: |
| — слабовыраженная положительная реакция | До 5 мм |
| — умеренно выраженная реакция | 5–9 мм |
| — выраженная реакция | 10–14 мм |
| — гиперергическая реакция | 15 мм и более, а также при везикуло-некротических изменениях и (или) лимфангоите, лимфадените независимо от размера инфильтрата |
Однако и у «Диаскинтеста» есть недостатки:
Что нужно знать о кожных пробах?
Что выбрать: пробу Манту или «Диаскинтест»?
Если сравнивать диагностическую эффективность тестов, то «Диаскинтест» дает значительную фору туберкулиновой пробе. Тем не менее среди фтизиатров есть адепты как пробы Манту, так и «Диаскинтеста». Впрочем, сравнительные исследования говорят не в пользу проб с туберкулином — ведь реакция на них еще не означает заболевания или заражения микобактерией. Плюс массовая вакцинация БЦЖ резко снижает их диагностические способности [6].
В качестве примера можно привести отечественное исследование, в котором сравнивали результаты кожных проб [6]. Оказалось, что у подростков, живших в близком контакте с больными открытой формой туберкулеза (бактериовыделителями), положительные реакции на введение туберкулина наблюдались в 77,9% случаев, заболевание же было выявлено только у 4,9%. При этом положительные реакции на «Диаскинтест» отметили лишь у 5,6%, из которых в 62,5% случаев выявили туберкулез [6]. По оценкам российских ученых, результативность «Диаскинтеста» в выявлении активного туберкулеза может превышать результативность пробы Манту 2 ТЕ в 40 раз (табл. 3) [11]!
| Результат пробы Манту | Результат «Диаскинтеста» | |
|---|---|---|
| В норме: | ||
| у непривитых БЦЖ | Отрицательный | Отрицательный |
| у привитых БЦЖ | Слабоположительный или положительный без гиперергии | Отрицательный |
| При заражении: | ||
| у непривитых БЦЖ | Положительный | Слабовыраженный или положительный в зависимости от активности процесса* |
| у привитых БЦЖ | Резко положительный | Слабовыраженный или положительный в зависимости от активности процесса* |
| * Не учитывается ситуация (10–20% случаев), когда результат «Диаскинтеста» ложноотрицательный. | ||
Анализы крови на туберкулез: плюсы и минусы
Открытие специфичных для M. tuberculosis антигенов позволило разработать лабораторные тесты для диагностики туберкулеза. Это широко известные анализы IGRA (Interferon-Gamma Release Assays), к которым относятся T-SPOT®.TB и QuantiFERON-TB Gold In-Tub («Квантиферон»).
Технология их проведения довольно проста: у пациента берут венозную кровь, смешивают ее с белками ESAT-6, CFP-10 и TB 7.7, после чего наблюдают за реакцией. То есть за количеством Т-лимфоцитов (T-SPOT®.TB) или гамма-интерферона («Квантиферон») [12].
Многие необоснованно считают эти тесты «золотым стандартом» диагностики туберкулеза и его латентных форм, хотя их результаты могут лишь косвенно свидетельствовать об активной инфекции микобактерией или о носительстве — процессах, которые IGRA-анализы не различают [12]. И если ориентироваться на руководства ВОЗ, а также Европейского центра по контролю и профилактике заболеваний (ECDC), «золотых стандартов» в диагностике латентных форм туберкулеза не существует в принципе. Как не существует и адекватной модели латентной туберкулезной инфекции. Поэтому для оценки границ результатов IGRA-анализов приходится использовать так называемые «суррогаты» — показания людей с подтвержденным активным туберкулезом [12]. А это только усложняет ситуацию, потому что у больных туберкулезом снижен клеточный иммунитет, и их показатели не могут служить основой для оценки диагностики латентной инфекции [6].
Вдобавок, отрицательный результат IGRA-анализов крови, не является гарантией отсутствия заболевания; от ложных результатов они тоже не застрахованы. Например, при тестировании «Квантифероном» ложноотрицательные результаты возможны:
Добавлю, что тесты IGRA требуют наличия качественного оборудования, специальных реактивов и квалифицированного персонала, поэтому себестоимость у них довольно высока.
Кроме того, по сравнению с кожными тестами существенным недостатком этих анализов является определение in vitro только образования гамма-интерферона или активности Т-клеток. Поэтому в странах с высокой заболеваемостью (а Россия, несомненно, в их числе с показателем более 50 больных на 100 000 населения [13]) у IGRA-анализов нет никаких дополнительных преимуществ [12]. Тем более что их способность диагностировать туберкулезный процесс колеблется в районе 42–90% для разных возрастных групп, к тому же они не маркируют латентное носительство [12]. Другими словами, для жителей нашей страны анализы крови на туберкулез в общем-то напрасная трата денег, хотя в странах с низкой заболеваемостью (США, Канада, Западная Европа) они более информативны и рекомендованы к замене туберкулиновых проб для привитых БЦЖ [14].
В мире живет более полумиллиарда латентных носителей M. tuberculosis. Причем, далеко не каждый из них в итоге заболевает, потому что размножение микобактерии сдерживает иммунная система. Например, из 100 инфицированных палочкой Коха детей, лишь у одного развивается активная форма туберкулеза, поэтому диагностические тесты направлены не только на выявление латентных носителей, но и на оценку риска развития заболевания [15].
Анализы крови vs кожные тесты: сравнение эффективности
При оценке эффективности тестов для диагностики туберкулеза чаще всего учитывают два параметра: чувствительность (sensitivity) и специфичность (specificity). Под чувствительностью понимают способность метода выявлять лиц с заболеванием или носителей с высоким риском развития туберкулеза. Под специфичностью — способность теста правильно идентифицировать людей, у которых нет туберкулеза (то есть этот параметр характеризует риск появления ошибочных ложноположительных результатов) [12].
Согласно исследованиям, у анализов крови IGRA достаточно высокая специфичность, но проблемы с чувствительность (табл. 4), поэтому они не могут стать основным инструментом в диагностике туберкулеза, особенно в странах с высокой заболеваемостью. Что касается «Диаскинтеста», то если верить отечественным публикациям [4], [6], [10], [11], он обладает и высокой специфичностью, и высокой чувствительностью (табл. 4). Чудо, а не тест! Однако высокая чувствительность не равняется абсолютной, поэтому и у «Диаскинтеста» случаются «проколы» в виде ложных результатов (чаще всего они наблюдается у детей до двух лет или у лиц с сопутствующими тяжелыми заболеваниями [11]).
| «Квантиферон» [12] | T-SPOT®.TB [12] | Проба Манту [12] | «Диаскинтест» [2] | |
|---|---|---|---|---|
| Общая чувствительность | 80%* | 81%** | 65%*** | 93,3% |
| Общая специфичность | 79% | 59% | 75% | 93,7% |
| * Общая чувствительность 81% (95% CI 78–84%) для пациентов с подтвержденным туберкулезом. ** Общая чувствительность 92% (95% CI 90–93%) для пациентов с подтвержденным туберкулезом. *** Общая чувствительность 68% (95% CI 63–72%) для пациентов с подтвержденным туберкулезом. CI — confidence interval, доверительный интервал. | ||||
В общем, анализы крови вряд ли смогут полностью заменить собой пробу Манту 2 ТЕ (и тем более «Диаскинтест», если речь идет об РФ). Но, быть может, они могут стать одним из дополнительных инструментов в диагностике активной туберкулезной инфекции? Да, такая возможность существует, но и здесь есть оговорки. Например, для пациентов с внелегочным туберкулезом, ВИЧ-инфицированных или детей старше пяти лет их можно рассматривать в качестве дополнительного метода. Однако в настоящее время существует ограниченное количество исследований этих тестов [12], поэтому далеко идущие выводы делать рано (табл. 5).
| Проба Манту [12] | «Квантиферон» [12] | T-SPOT®.TB [12] | «Диаскинтест» | |
|---|---|---|---|---|
| Специфичность | 89,4% | 85,8% | 84% | 86,3% [2] |
| Чувствительность | 65,4% | 79,9% | 42,2% | 90,5–96,7% [2] |
| 94,8 [11] |
Какой тест все-таки выбрать?
Как говорится, при всем богатстве выбора альтернатив немного. К сожалению, при выборе теста многие руководствуются не его диагностическими характеристиками, а безвредностью для здоровья, потому что фенол в составе кожных проб пугает многих. И существует даже движение против пробы Манту, группа поддержки которого периодически предлагает заменить ее анализами крови IGRA. Но, как было отмечено выше, у подобных страхов нет никаких оснований. В придачу, являясь продуктом жизнедеятельности организма, фенол не накапливается, а выводится вместе с мочой. Поэтому главными критериями все-таки являются чувствительность и специфичность тестов.
На данный момент, наилучшие характеристики демонстрирует только «Диаскинтест». Однако, несмотря на это, в массовой диагностике продолжают использовать пробу Манту 2 ТЕ, и она вполне удовлетворяет фтизиатров. Ведь «Диаскинтест» (также как и IGRA-анализы) не реагирует на инфекцию, вызванную M. bovis. Кроме того, его внедрили в массовую диагностику лишь 10 лет назад, а это слишком небольшой срок, чтобы полностью удостовериться в его диагностической эффективности и «списать» туберкулиновую пробу за ненужностью.
Что касается анализов крови IGRA, то они слишком дороги, не превосходят «Диаскинтест» в чувствительности и не различают латентное носительство. А в мире, где живет более 10 миллионов туберкулезных больных и 1,7 миллиарда носителей микобактерий [3], это является существенным недостатком.