Оксидаза отрицательные что значит
Санитарный контроль
в пищевой промышленности
Исследование воды (часть 4)
Оксидазный тест предназначен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитных бактерий, которые обладают активной оксидазой и окисляют фенилендиаминовые соединения до индофенола, окрашивающего колонии в ярко-синий цвет.
Для определения оксидазной активности бактерий готовят специальный реактив: 30—40 мг α-нафтола растворяют в 2,5 мл ректификованного этилового спирта, добавляют 7,5 мл дистиллированной воды и 40—60 мг диметил-n-фенилендиамина. Реактив готовят непосредственно перед определением.
Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, обильно смоченный реактивом. Через 2—4 мин оценивают результат.
Колонии посиневшие или с синим ободком относят к семейству Pseudomonadaceae и при анализе не учитывают.
Колонии, не изменившие своего первоначального цвета, — оксида-зоотрицательные, относят к семейству Enterobacteriaceae. Отсутствие оксидазы у темно-красных с металлическим блеском и без него колоний грамотрицательных палочек позволяет дать положительный ответ о наличии бактерий группы кишечных палочек и закончить исследование воды подсчетом оксидазоотрицательных колоний и вычислением коли-индекса.
При обнаружении на фильтрах розовых и бесцветных колоний грамотрицательных палочек с отрицательной оксидазной активностью их подсчитывают и 2—3 изолированных колонии каждого типа высевают в полужидкую среду с глюкозой. Культивируют при 37°С и проводят учет через 4—5 ч. Наличие кислоты и газа в полужидкой среде с глюкозой подтверждает принадлежность этих бактерий к группе кишечных палочек.
Коли-индекс вычисляют следующим образом. Количество бактерий группы кишечных палочек, выросших при посеве исследуемого объема воды, умножают на 1000 мл и делят на весь объем исследуемой воды.
Если на одном из фильтров наблюдается сплошной рост бактерий и подсчет их невозможен, то коли-индекс вычисляют по тому объему, в котором на фильтре выросли изолированные колонии. Например, в 100 мл посеянного объема из фильтре сплошной рост бактерий, в объеме 10 мл на фильтре выросло 12 колоний бактерий кишечной палочки, следовательно, коли-индекс равен (12·1000) : 10= 1200.
Метод бродильных проб. Сущность метода заключается в следующем. Производят посев определенных объемов исследуемой воды в глюкозо- или лактозопептонные среды и культивируют при 37°С в течение 24 ч. Затем высевают на среду Эндо, изучают выросшие колонии и по табл. 16, 17, 18 определяют наиболее вероятное число бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды.
Воду методом бродильных проб исследуют в три этапа. На первом этапе определенные объемы исследуемой воды высевают во флаконы и пробирки с глюкозопептонной средой и индикатором. Флаконы (пробирки) снабжены поплавками для учета газообоазования. Посев 100 и 10 мл воды производят во флаконы и пробирки с 10 и 1 мл концентрированной среды; посев 1 и 0,1 мл воды — в пробирки с 10 мл среды нормальной концентрации. Посевы культивируют при 37°С в течение 24 ч.
На втором этапе исследования из флаконов и пробирок, где отмечено помутнение, образование кислоты и газа, производят высев бактериологической петлей штрихами на поверхность среды Эндо (предварительно чашку со средой Эндо со стороны дна делят на секторы). Посевы культивируют при 37°С 18—24 ч.
Типы биохимических тестов, для чего они нужны и какое значение
биохимические тесты в микробиологии они представляют собой набор химических тестов, которые проводятся на микроорганизмах, присутствующих в образце, для их идентификации; Эти микроорганизмы обычно являются бактериями. Существует большое количество биохимических тестов, доступных для микробиолога.
Тем не менее, выбор этих тестов основан на предварительных результатах, таких как картина окраски по Граму и признаки роста, которые позволяют бактериям относиться к определенной категории. Биохимические тесты основаны главным образом на метаболических свойствах каждого типа бактерий..
Не все бактерии имеют одинаковые свойства, поэтому исследуют, имеют ли они какой-либо конкретный фермент, добавляя субстрат и ожидая реакции. Обычно это определение определяется изменением цвета или pH в культуральной среде..
Для надежной идентификации бактерии до уровня вида часто требуется менее 15 биохимических тестов. Выполнение большего количества биохимических тестов может повысить уверенность в идентификации.
Большинство из этих биохимических тестов проводятся в сыворотке или плазме крови. Тем не менее, они также могут быть выполнены в других биологических выделениях, таких как моча, спинномозговая жидкость, плевральная жидкость и стул, среди других..
классификация
Биохимические тесты можно разделить на 3 группы:
универсальный
Это тесты, которые могут быть выполнены на любом образце и которые направляют микробиолога на следующие биохимические тесты, которые необходимо выполнить, чтобы получить надежную идентификацию..
пример
Тест каталазы и оксидазы.
дифференциалы
Это тесты, которые проводятся для выявления микроорганизмов, присутствующих в образце до уровня видов.
Идентификация производится на основе результатов комбинации тестов, поскольку отдельные результаты не достаточно информативны, чтобы сделать идентификацию.
пример
IMViC тесты и тесты на утилизацию сахара.
специфические
Это специфические тесты для определенного набора видов или для подтипа вида. Эти тесты обычно проводятся для подтверждения или идентификации на уровне подвидов. Индивидуальные тесты сами по себе информативны.
пример
Тест на γ-глутамиламинопептидазу.
Типы биохимических тестов
Тест каталазы
Если наблюдаются пузырьки кислорода, это означает, что бактерия обладает ферментом каталазы, потому что она катализирует разложение перекиси водорода на кислород и воду. Тогда говорят, что организм является положительным каталазой (например: Золотистый стафилококк).
Тест на оксидазу
Этот тест используется для идентификации микроорганизмов, которые содержат фермент цитохромоксидазу (важный в цепи транспорта электронов). Обычно используется для различия между семействами Enterobacteriaceae и Pseudomadaceae..
Цитохромоксидаза переносит электроны из цепи переноса электронов в кислород (конечный акцептор электронов) и восстанавливает его до воды. Тесты на оксидазу дают искусственные молекулы доноров и акцепторов электронов.
Когда донор электронов окисляется под действием цитохромоксидазы, среда становится темно-фиолетовой и считается положительным результатом. Микроорганизм Pseudomonas aeruginosa является примером положительной оксидазы бактерии.
Соленый маннитовый агаровый тест (MSA)
Этот тип теста является выборочным и дифференциальным. MSA выберет организмы, способные жить в средах с высокой концентрацией соли, таких как виды стафилококк в отличие от видов стрептококк, чей рост тормозится в этих условиях.
Дифференциальным компонентом в этом тесте является сахарный маннит. Организмы, способные использовать маннит в качестве источника пищи, будут производить побочные продукты брожения, которые являются кислыми и, следовательно, будут понижать рН среды.
Кислотность среды приводит к тому, что индикатор pH, феноловый красный, желтеет. Примерами видов бактерий, которые можно дифференцировать этим методом, являются: Золотистый стафилококк (положительно, потому что он ферментирует маннит) и Стафилококк эпидермидис (отрицательно, потому что маннит не ферментируется).
Коагулазный тест
Образование сгустков вокруг инфекции, вызванной этой бактерией, вероятно, защищает ее от фагоцитоза. Этот тест очень полезен, когда вы хотите различить Золотистый стафилококк других видов стафилококк которые являются негативной коагулазой.
Тест на уреазу
Этот тест используется для выявления бактерий, способных гидролизовать мочевину, с помощью фермента уреазы. Обычно используется для различения пола Протей других кишечных бактерий.
Гидролиз мочевины производит аммиак как один из его продуктов. Это слабое основание увеличивает pH среды выше 8,4, а индикатор pH (феноловый красный) меняется с желтого на розовый. Примером положительной уреазной бактерии является Proteus mirabilis.
Для чего нужны биохимические тесты??
Биохимические тесты в микробиологии используются для диагностики заболеваний, вызванных микробами, и для мониторинга лечения, направленного на борьбу с ними. Кроме того, они используются для скрининга инфекционных заболеваний и для их прогноза..
Биохимическая идентификация микроорганизмов дает представление о том, на что способны эти микроорганизмы, поскольку возможно различение разных штаммов одного и того же вида по определенным биохимическим профилям..
Различия в специфических ферментативных действиях сообщают об экологии, физиологии или естественной среде обитания микроорганизма, что в некоторых случаях может считаться важной информацией.
важность
Структурные различия в отношении формы, размера и расположения бактерий очень мало помогают в процессе идентификации, поскольку существует много видов бактерий, которые имеют сходную форму, размер и расположение..
По этой причине, в конечном счете, идентификация бактерий основана главным образом на различиях в их биохимической активности..
Каждый вид бактерий обладает четко определенным набором метаболических активностей, отличным от всех других видов. Эти биохимические «отпечатки пальцев» являются свойствами, контролируемыми бактериальными ферментами.
Таким образом, биохимические тесты важны, потому что они помогают исследователю правильно идентифицировать патогенные микроорганизмы, присутствующие в образце, и, таким образом, иметь возможность рекомендовать соответствующее лечение пациенту..
Оксидаза отрицательные что значит
Окислительно-восстановительные реакции, лежащие в основе метаболических процессов, обеспечивающих жизнеспособность всех без исключения животных, растительных организмов и бактериальных клеток, протекают с участием двух субстратов (окисляемого и восстанавливаемого). Окисление характеризуется отщеплением атомов водорода (протонов) или электронов от субстрата-донора, восстановление-присоединением протонов или электронов к субстрату-акцептору. Ферменты, катализирующие окислительно-восстановительные реакции, объединяют в один класс оксидоредуктаз. Различают следующие основные оксидоредуктазы: аэробные оксидазы (гидрогеназы), анаэробные дегидрогеназы и цитохромоксидазы.
• Аэробные оксидазы катализируют перенос протонов или электронов с окисляемого субстрата непосредственно на конечный акцептор — кислород воздуха. Определение оксидазы используется в микробиологии для идентификации аэробных бактерий.
• Анаэробные дегидрогеназы участвуют в реакциях, в которых протоны или электроны переносятся с одного компонента окисляемой цепи на различные неорганические соединения — сульфиты, карбонаты, нитриты, нитраты, серу, железо (III) и пр.
• Цитохромоксидазы катализируют перенос только электронов. Последние на цитохромоксидазу передаются цитохромами — сложными железосодержащими белками, простетическая (небелковая) группа которых представлена гемом. Цитохромы содержатся в животных, растительных клетках, факультативно-анаэробных микроорганизмах.
В телах микробных клеток цитохромы локализуются в периплазматическом пространстве между внутренней поверхностью пептидогликанового слоя и плазматической мембраной. Все цитохромы способны принимать и отдавать электроны путем обратимого изменения валентности атомов железа, входящих в состав гема. Механизм переноса состоит в том, что электроны от субстрата воспринимаются окисленным ионом железа, содержащимся в простетической группе этого фермента. Железо восстанавливается (Fe → )Fe 2+ ), а затем электрон передается молекулярному кислороду, и при взаимодействии его с ионами водорода образуется молекула воды.
1. Оксидазные тесты. Оксидазные тесты используют для дифференциации представителей родов Neisseria, Alcaligenes, Aeromonas, Vibrio, Campylobacter, Pseudomonas, обладающих оксидазной активностью, и оксидазоотрицательных Enterobacteriaceae.
Тест основан на том, что у некоторых бактерий биологическое окисление в целях получения энергии осуществляется при помощи цитохромоксидазы либо индофенолоксидазы — железосодержащего белка гемопротеина, который катализирует перенос электронов от вещества-донора (например, НАД-Н) к веществам реципиентам (обычно к O2). Для того чтобы этот процесс получил визуальное выражение, пользуются методами Ковача или Gaby-Hadley, основанными на введении в питательную среду искусственных бесцветных реагентов в восстановленном состоянии, которые в присутствии микробной оксидазы окисляются и приобретают соответствующую им окраску.
Техника постановки теста. Оба метода могут быть воспроизведены в двух вариантах:
— в прямом с нанесением одного из реактивов непосредственно на колонии исследуемой культуры, помещенные в чашки Петри;
— в непрямом, при котором из материала исследуемой культуры платиновой петлей, запаянной пипеткой Пастера или заостренной стерильной палочкой делают мазок на полоске фильтровальной бумаги, пропитанной одним из реактивов.
Метод Ковача (вариант 1). Для постановки теста используют 16-18-часовую культуру испытуемого микроорганизма, выращенного в чашках Петри на МПА*. Свежеприготовленный реактив Ковача по 1-2 капли наносят пастеровской пипеткой или стерильным дозатором на поверхность изолированных колоний либо несколько миллилитров этого реактива наливают на поверхность среды и, осторожно покачивая чашку, распределяют реактив тонким слоем по всей площади.
P.S. *Здесь и далее рецепты красителей, индикаторов, буферных растворов, реактивов и питательных сред для постановки биохимических тестов см. в одноименном разделе, завершающем часть I.
При контакте с тетраметил-п-фенилендиамином (реактив Ковача) колонии, продуцирующие цитохромоксидазу, в ближайшие 10-30 с из бесцветных превращаются в темно-фиолетовые вследствие образования соединения вурстеровского синего.
Метод Ковача (вариант 2). Полоску фильтровальной бумаги помещают на дно чашки Петри с реактивом Ковача и пропитывают ее до влажного состояния. Затем на влажную бумагу платиновой петлей или запаянной пипеткой Пастера наносят исследуемую микробную культуру в виде мазка для микроскопии или штриха. Оксидазоположительные культуры через 20-30 с приобретают темно-синюю окраску, оксидазотрицательные — сохраняют исходный цвет.
Метод Gaby-Hadley. Техника постановки цитохромоксидазного теста методом Gaby-Hadley отличается от описанного выше метода Ковача только тем, что для выявления цитохромоксидазы используют реактив Gaby-Hadley, выполняющий роль искусственного акцептора электронов.
В присутствии цитохромоксидазы N, N-диметил-фенилендиамин с α-нафтолом (компонентом реактива Gaby-Hadley) образуют соединение индофенол синий. Цитохромоксидазные колонии и мазки, приготовленные из них, на фильтровальной бумаге в течение первой минуты окрашиваются в отчетливо синий цвет.
Примечание. При постановке теста на цитохромоксидазу посев исследуемых культур должен выполняться платиновыми, пластиковыми петлями или запаянными пастеровскими пипетками, так как на железной или нихромовой проволоке образуются окислы железа, которые могут привести к получению ложноположительных результатов. По этой же причине рекомендуется для получения дистиллированной воды пользоваться стеклянным дистиллятором.
2. Тест с лакмусовым молоком. Используется для выявления отдельных реакций метаболизма при дифференциальной диагностике и идентификации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.
При выращивании микроорганизмов в лакмусовом молоке выявляются различные ферментативные реакции:
— ферментация лактозы, сопровождающаяся образованием различных кислых продуктов реакции, ведущая к смещению pH в кислую зону с приобретением средой розового цвета;
— накопление достаточного количества кислоты в среде (связанное с расщеплением лактозы), сопровождающееся коагуляцией казеина с формированием казеинового сгустка;
— синтез протеолитических ферментов культивируемыми бактериями, приводящий к пептонизации казеина и превращению молока в соломенно-желтую мутную жидкость, напоминающую сыворотку;
— при активном образовании растущими бактериями декарбоксилаз, которые вступают в реакции с аминокислотами, образующими казеин, в среде накапливаются амины, pH смещается в щелочную зону с окрашиванием среды в выраженный голубовато-синий цвет;
— некоторые микроорганизмы, не вызывая существенного изменения pH среды, редуцируют лакмус, в результате чего среда обесцвечивается без изменений каких-либо других первоначальных ее свойств;
— при культивировании в лакмусовом молоке биохимически инертных бактерий никаких изменений в реакции среды и соответственно первоначального ее цвета не происходит.
Тест основан на комплексе ферментативных реакций, проявлению которых соответствуют характерные изменения первоначальных свойств питательной среды.
Техника постановки теста. Пробирки с лакмусовым молоком — средой Минкевича засевают 18-часовой исследуемой культурой с плотной или жидкой питательной среды. Посевы инкубируют в термостате при температуре 36(±1)°С в течение 7-10 дней, ежедневно наблюдая за изменениями свойств среды.
Учет результатов. Результаты изменения среды отмечают в протоколе исследования, пользуясь следующими обозначениями:
Н — рост бактерий, не сопровождающийся изменением реакции среды и, следовательно, изменением ее цвета;
К — кислотообразование в среде с четко выраженным ее порозовением;
НК — слабовыраженное кислотообразование, вызывающее изменение оттенка среды, улавливаемое только при сопоставлении опытной пробирки с контрольной (незасеянная среда);
Щ — щелочеобразование, сопровождающееся четко выраженным посинением среды;
НЩ —слабовыраженное щелочеобразование, вызывающее изменение оттенка среды, улавливаемое только при сопоставлении ее с цветом контрольной пробирки;
Р — редукция лакмуса, проявляющаяся полным обесцвечиванием лакмуса.
3. Тест на редукцию метиленового синего. В окисленном состоянии метиленовый синий используется при окраске микроскопических препаратов. При восстановлении краситель обесцвечивается, утрачивая свойства красящего вещества.
Редуцирующая активность в отношении метиленового синего используется в качестве дифференциально-диагностического теста при идентификации энтерококков и других видов условно-патогенных микроорганизмов.
Тест основан на способности молока, представляющего собой питательный субстрат для культивируемых микроорганизмов, при введении в него метиленового синего приобретать интенсивный голубой цвет и обесцвечиваться при росте в нем микроорганизмов с редуцирующей способностью в отношении метиленового синего.
Техника постановки теста. В пробирки с 5 мл молока с метиленовым синим засевают петлей 18-часовую бактериальную культуру с плотной питательной среды или 0,1 мл бульонной культуры. Результат реакции учитывают через 24 ч после инкубации посевов в термостате при температуре 36,5(+0,5) °С.
Учет результатов. При положительном результате редукции метиленового синего молоко приобретает кремовый цвет. Реакция отмечается буквой «р». При слабоположительной реакции среда имеет светло-зеленую окраску. Реакция обозначается р±. При отрицательном результате цвет реакции остается без изменений.
Положительный контроль: Е. faecalis, Е. faecium.
Отрицательный контроль: Streptococcus spp.
4. Тест на редукцию ТТХ (2,3,5-трифенилтетразолия хлорида C19H15ClN4). Используется для дифференциальной диагностики энтерококков и других микроорганизмов.
Тест основан на восстановлении 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида — бесцветного химического соединения, до трифенилформазана, который в органических растворителях и под действием продуктов жизнедеятельности некоторых видов микроорганизмов, в частности энтерококков, восстанавливается и приобретает вишневую окраску.
Техника постановки теста. Исследуемую 18-часовую агаровую или бульонную культуру микроорганизмов высевают штрихами на питательную среду с ТТХ. Посевы инкубируют при 36(±1) °С в течение 24 ч.
Учет результатов. Колонии микроорганизмов, восстанавливающих ТТХ (ТТХ+), имеют на чашке вишнево-красный цвет. Колонии (ТТХ-), не редуцирующие ТТХ или имеющие слабую редукционную активность, образуют бесцветные колонии или с неярко выраженным розоватым оттенком.
Положительный контроль: Е. faecalis.
Отрицательный контроль: Е. faecium.
5. Тест на каталазу. Каталаза (греч. katalisys — разрушение) — фермент, способствующий расщеплению перекиси водорода на воду и молекулярный кислород.
В клетках бактерий фермент образуется в процессе биохимического окисления, поэтому обнаружить его можно только в молодых жизнедеятельных культурах.
Тест на каталазу в практике микробиологических исследований используется очень широко для дифференциации и идентификации ряда патогенных и условно-патогенных бактерий.
Тест основан на том, что с первых же секунд контакта перекиси водорода с каталазой начинается ее расщепление, сопровождающееся более или менее интенсивным выделением пузырьков кислорода.
Техника постановки реакции и учет результатов. Чистую 18-20-часовую культуру идентифицируемого микроорганизма высевают на чашки Петри или в пробирки на питательный мясопептонный либо сахарный агар. Питательные среды, содержащие кровь человека или животных, для постановки каталазного теста не применяются в связи с возможностью получения ложноположительных результатов из-за каталазной активности форменных элементов крови.
Посевы инкубируют при 36(±1)°С не более суток. Для выявления каталазы у выделенных культур предложено 2 способа:
Способ 1. На поверхность выращенной в чашке Петри или пробирке микробной культуры наносят тест-реактив — свежеприготовленный 3% раствор перекиси водорода с таким расчетом, чтобы он тонким слоем покрыл поверхность культуры.
Способ 2. На чистое, хорошо обезжиренное предметное стекло наносят каплю свежеприготовленного 3% раствора перекиси водорода и эмульгируют в ней 1 петлю исследуемой культуры.
При наличии каталазы в микробной культуре на поверхности среды или в капле раствора перекиси водорода на предметном стекле в первые же 2-3 с появляются пузырьки кислорода. Газообразование может быть бурным или умеренным. Независимо от его интенсивности реакция учитывается как положительная.
Появление единичных пузырьков или наступление газообразования в более отдаленные сроки (13-15 с) расценивается как реакция сомнительная, требующая повторной постановки.
Отсутствие газообразования или появление одиночных пузырьков газа через продолжительное время после добавления реактива определяется как реакция отрицательная.
Контроль положительный: Pseudomonas spp., Proteus spp.
Контроль отрицательный: Streptococcus spp., Clostridium spp.
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 22.05.2019
Микрообъемная биохимическая идентификация энтеробактерий
В лабораторной практике идентификация видов и биоваров энтеробактерий проводится по их фенотипическим признакам. Основным и наиболее сложным разделом идентификации является изучение биохимических свойств бактерий. Повсеместно за рубежом и во многих лабораториях нашей страны биохимическая идентификация бактерий осуществляется микрообъемной технологией. При этом используются специальные микрообъемные тест-системы для автоматических бактериологических анализаторов или различные коммерческие тест-системы биохимической идентификации бактерий для визуального учета. Микрообъемная технология наиболее экономична, проста, пригодна для автоматизации и стандартизации исследований.
Коммерческие микрообъемные тест-системы по устройству представлены двумя группами: содержащими субстрат реакции в питательной среде или в шаблоне-носителе. Результаты биохимических тестов учитываются визуально, вид микроорганизма устанавливается с помощью таблицы идентификации, кодов (профилей) или компьютерных программ.
Тест-система Rapid 20E (Bio Merieux) предназначена для биохимической идентификации энтеробактерий и других грамотрицательных палочек в течение 4 ч. Состоит из прозрачной полимерной пластинки с 20 микропробирками, содержащими дегидратированные субстраты для определения 20 тестов: β-D-галактозидазы, лизиндекарбоксилазы, орнитидекарбоксилазы, уреазы; образования индола, ацетоина; ферментации цитрата, эскулина, маннитола, арабинозы, ксилозы, адонитола, рамнозы, целлобиозы, мелецитозы, сахарозы, трегалозы, рафинозы, глюкозы. Исследования проводят так же, как тест-системой API 20E. Результаты учитывают через 4 ч инкубации при 36 °С. Вид бактерий идентифицируют по кодам.
Общим, недостатком всех рассмотренных тест-систем (API 20E, Rapid 20E, Enterotest I и Enterotest 2, Enterotest 16, Entero-Screen, MMTE 1 и ММТЕ 2), является необоснованный перерасход тест-систем, ввиду отсутствия предварительного отбора культур по тесту ферментации глюкозы или позднего учета О/Ф теста с глюкозой (уже после использования тест-систем).
Комплект состоит из флаконов с полимерными капельницами, содержащих по 22 мл жидких дифференциальных сред; флаконов с капельницами, содержащих по 22 мл реактивов, и стерильных полистироловых 96-луночных планшетов длямикротитрования однократного применения с крышками. Тест-система обеспечивает постановку 13 тестов: выявление уреазы, триптофандезаминазы, индола, эскулина, лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы, нитратредуктазы; ферментации лактозы, сахарозы, маннитола, маннозы, арабинозы, адонитола. Исследованию подлежат чистые культуры, выросшие из отсевов колоний со сред выделения на секторах питательного агара (или питательного агара с желчью). Предварительно определяют их возможную принадлежность к семейству энтеробактерий экспресс- тестом на цитохромоксидазу, тестом «тяжа» на грамотрицательные бактерии, ферментацию глюкозы на среде Клиглера. На среде Клиглера учитывают также газообразование при ферментации углеводов и образование сероводорода. Дальнейшему исследованию подлежат грамотрицательные, оксидазонегативные, ферментирующие глюкозу бактерии. Дифференциальные среды во флаконах готовы к немедленному использованию. Для их применения срезают ножницами с соблюдением стерильности верхний закрытый край полимерной капельницы и закрывают отверстие съемным колпачком капельницы. При исследованиях среда из флакона выдавливается по каплям путем надавливания пальцами на эластичные стенки капельницы. Дифференциальные среды вносят в планшеты по 4 капли (100 мкл) в лунку. Среды для одной культуры размещают в одном горизонтальном ряду из 12 лунок в постоянной последовательности (в одной лунке с маннитом содержится и субстрат на нитратредуктазу).
Специфичность (достоверность) идентификации энтеробактерий тест-системой составляет 97,6 ± 0,6 %. Диагностическая чувствительность: идентификация 96 ± 0,5 % изолятов энтеробактерий. Это единственная отечественная тест-система ускоренной идентификации энтеробактерий. Она наиболее экономична, обеспечивает большой объем исследований, проста и надежна в использовании. Стоимость одного исследования существенно дешевле, чем всеми другими тест-системами.
Выпускается также вариант тест-системы «РАПИД-ЭНТЕРО-50» на 50 исследований.
Для идентификации редких видов энтеробактерий, не предусмотренных тест-системами, применяют дополнительные тесты в соответствии с видовой характеристикой энтеробактерий, указанной в определителе бактерий Берджи (см. Приложение).