Гистологическое заключение
С помощью биопсии можно обнаружить и доброкачественные образования, например, кисты или папилломы. Также она помогает обнаружить опухоли, которые называются жировым некрозом (омертвевшие жировые клетки молочной железы, что очень часто встречается после перенесенной травмы).
Чаще всего перед биопсией пациент проходит ряд исследований, направленных на то, чтобы выяснить объемы распространения опухоли. К таким исследованиям относятся маммография и УЗИ.С помощью данных методов специалист делает вывод о местонахождении опухоли, ее и ее глубине. Если опухоль расположена очень глубоко, биопсия проводится под контролем УЗИ или рентгена.
Аспирационная биопсия
Одним из неоперативных методов является аспирационная биопсия, которая предполагает взятие образца беспокоящего участка молочной железы с помощью иглы или шприца. Данный метод имеет ряд преимуществ. Например, пациент подвергается меньшему нервному воздействию, кроме того кожа не повреждается, поэтому на коже молочной железы не остается ни рубцов, ни шрамов. Это важно не только с эстетической, но и медицинской точки зрения. При последующих маммографических исследованиях рубец не будет мешать качественной расшифровке результатов. Кроме того такой вид биопсии предполагает минимальный риск осложнений. Однако, у неоперативных способов диагностики есть существенный минус – не всегда с их помощью можно поставить верный и окончательный диагноз. Именно поэтому, в большинстве случаев оперативное вмешательство необходимо.
Виды биопсии:
Как проводится гистологическое исследование: виды, методы, особенности
Злокачественные новообразования — это группа заболеваний, насчитывающая несколько тысяч видов опухолей разных типов и разной степени злокачественности. Они подразделяются на большие группы в зависимости от того из каких тканей они развиваются: если из эпителиальных (барьерных) — то это раки, если из соединительных тканей (мягких тканей и костей) – саркомы, если из лимфоидных (иммунных) – лимфомы/лейкозы. От того насколько правильно верифицирована опухоль (определен ее тип, степень злокачественности и другие характеристики) зависит правильность и эффективность лечения. Важную роль в этом играют гистологические исследования.
О том, как проходят гистологические исследования, какие задачи кроме диагностических они позволяют решать, что влияет на сроки их выполнения рассказывает заведующая патологоанатомическим отделением с прозектурой НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, к.м.н. Анна Сергеевна Артемьева.
Что служит материалом для патоморфологических (гистологических) исследований?
Процесс получения фрагмента ткани (биоптата) — биопсия – это несколько разных способов забора материала для гистологического исследования.
Биопсию внутренних органов делают под УЗИ-навигацией, либо с помощью хирургического вмешательства.
Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?
1 Этап. Фиксация — «консервирование» биоптата в формалине — специальном химическом растворе, который предотвращает гниение, позволяет сохранить структуры ткани.
Фиксация биоптата может занимать от 6 до 24 часов – в зависимости от его вида и размера.
Операционный материал фиксируется дольше, в несколько этапов. Сначала предварительная фиксация, которая занимает примерно 12 часов. Затем вырезка нужных фрагментов и повторная фиксация еще 24 часа.
Соотношение объема материала к объему формалина должно быть 1:20.
2 Этап. Процессинг — процесс обезвоживания, обезжиривания и пропитки материала парафином. Автомат перемещает кусочек материала из раствора в раствор.
В качестве растворов применяются: абсолютированный изопропиловый спирт (6-8 смен), ксилол (2 смены), расплавленный парафин (2 смены).
Программа разнится для «жирного» материала (к которым относятся, например, ткани молочной железы) и «нежирного» – 36 и 24 часа соответственно.
Процесс получения парафиновых блоков.
3 Этап. Изготовление парафинового блока. Кусок материала помещается в форму с расплавленным парафином (уже другим нежели во время процессинга – с более высокой температурой плавления) и охлаждается. Выполняется вручную, сложно ускорить.
4 Этап. Изготовление срезов. Толщина образца — кусочка ткани, залитого в парафин – 1-3 мм. Толщина каждого среза 4-5 мкм (0,004-0,005 мм). Выполняет лаборант с использованием специального инструмента – микротома.
Срезы монтируются на стекла и должны высохнуть.
Несмотря на то, что часть материала теряется при выравнивании в микротоме, при должном профессионализме, из одного образца — материала от одной биопсии, операционного материала от одной опухоли, возможно изготовить около 100 стекол (микропрепаратов).
Для чего делаются срезы?
Срезы делаются для рутинной окраски гематоксилинном и эозином, иммуногистохимического исследования и других видов исследований.
Срезы для всех исследований используются одинаковые, различается окраска, могут отличаться стекла, на которые они монтируются, так для ИГХ и FISH нужны специальные адгезивные стекла или заряженные стекла.
Блоки и стекла способны храниться долгие годы и использоваться для проведения дополнительных гистологических исследований, пересмотров, а также в научных целях.
Архив гистологических материалов собирается в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова с 1927 года и содержит более 10 млн единиц хранения (микропрепараты — стекла, парафиновые блоки, архивные карточки, влажный архив).
Какие виды гистологических исследований наиболее информативны?
Что позволяют определить разные виды гистологических исследований
Гистологическое исследование – что это такое?
Позволяет верифицировать опухоль – то есть определить из каких клеток она состоит (из какой ткани она развивается), степень ее дифференцировки (зрелости).
Рутинная окраска, выполняющаяся при гистологическом исследовании, позволяет выявить патологический процесс в анализируемом материале (биоптате, операционном материале):
Также, в большинстве случаев, благодаря рутинной окраске, можно определить степень злокачественности опухоли и, если она достаточно зрелая, то какова ее природа.
Окрашенные срезы под микроскопом
 |
Инвазивный протоковый рак er 100%.
Карцинома сигмовидной кишки.
Крупноклеточная нейроэндокринная опухоль.
МТС крупноклеточной нейроэндокринной опухоли.
Неспецифический рак молочной железы. Участок in situ карциномы внутри протока, криброзного типа.
Низкодифферинцированный рак пищевода.
При гистологическом исследовании биоптата и операционного материала можно оценить распространенность: размер опухоли и прорастание в окружающие ткани, насколько затронуты лимфоузлы и есть ли метастазы в отдаленные органы (если эти все структуры присланы для гистологического исследования). При консультации готовых микропрепаратов – стекол, это, как правило, невозможно, если опухоль больше размеров гистологической кассеты или рассечена предыдущим исследователем и не предоставлены данные макроскопического исследования.
Во время гистологического исследования изучаются все стекла от одного образца – материала, полученного от одного вмешательства — одной операции или одной биопсии, вне зависимости от их количества, это считается одной консультацией.
Сроки выполнения гистологического исследования зависят от количества микропрепаратов и от категории сложности того процесса, который в них обнаруживается, сроки могут удлиняться, особенно при необходимости использования дополнительных методов исследования и анализа дополнительных сведений. На сроки выполнения гистологического исследования влияет полнота предоставленной пациентом клинической информации, в том числе данных уже проведенных исследований.
Иммуногистохимия (ИГХ)
Сложное многоэтапное исследование, выполняется после гистологического исследования на том же материале. Опухолевые срезы окрашиваются антителами, которые способны связываться антигенами (белками), которые несут опухолевые клетки. Разные опухолевые клетки несут разные антигены, к каждому из которых подобно ключа к замку подходит антитело.
Один из этапов ИГХ
ИГХ исследование — это комбинаторика. 100% специфичных и чувствительных к какой-то опухоли маркеров не существует, но есть набор антигенов, которые в определенном типе опухоль должны быть и набор тех, которых там быть не должно, таким образом ИГХ-панель строится так чтобы включать несколько антител, которые должны быть позитивны и несколько, которые должны быть негативны. Для разных опухолей различаются эти наборы позитивных/негативных маркеров.
При проведении прогностической ИГХ – выявлении маркеров чувствительности к терапии определяется набор таких маркеров для конкретных опухолей, например, рака молочной железы: рецепторы стероидных гормонов (эстроген, прогестерон), рецептор эпидермального фактора роста (HER2) и индекс пролиферативной активности Ki67 (скорости деления клеток).
Стекла окрашиваются последовательно — различными антителами красятся наборы маркеров в несколько этапов, процесс окраски стекол одним антителом занимает 48 часов.
Таким образом, каждое антитело наносится на отдельный срез ткани, монтированный на отдельное стекло, как правило с соответствующим внешним контролем, количество реакций (используемых антител) и этапов окраски может существенно варьировать в зависимости от конкретной диагностической ситуации, все зависит от индивидуальных особенностей опухоли. Проводится такое количество окрасок, которое необходимо для того, чтобы выявить наиболее характерный для определенной опухоли набор позитивных и негативных маркеров.
Кому-то для этого будет достаточно 5 антител, а кому-то необходимо сделать 20 окрасок и более. Максимальное количество окрасок, которое нам приходилось делать – 212.
Поэтому точные сроки и стоимость этого исследования невозможно определить заранее. Разные по течению и прогнозу опухоли могут быть очень похожи друг на друга, только минимальные различия в окрашивании, с учетом клинических данных и данных других методов обследования, могут позволить установить верный диагноз.
Есть целый ряд доброкачественных опухолей, симулирующих злокачественные, в том числе высокоагрессивные, а некоторые злокачественные высоко дифференцированные опухоли трудно отличить от воспалительных и реактивных процессов. В таких ситуациях только опыт и квалификация патоморфолога, анализ всего комплекса доступной информации (снимки КТ, МРТ, рентген, протокол операции, и др.) позволяют поставить диагноз.
В грамотной интерпретации результатов ИГХ очень важна роль эксперта, ведь те случаи, с которыми приходится работать, в большинстве своем, сложные. Практически не существует антител, которые могут выступать в качестве 100%-х маркеров той или иной опухоли, врачу всегда приходится взвешивать различные вероятности.
Что определяется с помощью ИГХ?
Иммуногистохимия позволяет оценить потенциальный темп роста опухоли, ответ на химио-, таргетную, гормональную терапию.
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH-тест)
Это метод молекулярно-генетической диагностики в ткани.
FISH проводится в срезе ткани и позволяет привязать генетическую перестройку к конкретной опухолевой клетке.
В этом тесте также используются специальные красители, которые связываются только с определенными участками хромосом. Их называют зондами, которые могут быть помечены флуоресцентным или хромогенным красителем, визуализирующимися при помощи флуоресцентного или светового микроскопа.
Технические операции по подготовке гистологических стекол к этому исследованию занимает 2 рабочих дня.
Анализ препарата с помощью многоголового микроскопа.
Полученные микропрепараты очень чувствительны к внешней среде – они могут выцвести со временем, чтобы избежать потерь информации все FISH-препараты сканируются, создается их цифровая копия, которая доступна для внешнего пересмотра. Специалисты просматривают флуоресцирующий материал в темном поле, в анализе препарата принимают участие как минимум 2 специалиста. При необходимости используется и цифровой анализ.
Что определяется с помощью FISH-теста?
FISH-тест позволят диагностировать некоторые виды опухолей, определяет целесообразность использования некоторых химиотерапевтических препаратов.
Проведение гистологического исследования, и в первую очередь FISH-теста — это экспертная работа, которая зависит от квалификации специалиста. Очень многие мутации, которые выявляются в опухолях, не всегда являются метками опухолей, они могут находиться и в доброкачественных образованиях или нормальных тканях.
За год патологоанатомическое отделение НМИЦ онкологии имени Н.Н. Петрова выполняет около 20000 гистологических исследований (пациентов), из них около 5000 консультативных случаев (пересмотров), более 30000 ИГХ исследований, а также участвует в программе внешнего контроля качества ИГХ исследований NordIQ.
Специалисты отделения обладают огромным опытом проведения гистологических исследований и экспертными компетенциями.
Скорость выполнения гистологических исследований и адекватность гистологического заключения зависят от ряда факторов:
После выполнения гистологического исследования пациент получает гистологическое заключение/протокол исследования гистологического материала.
Расшифровка гистологического исследования: на что обратить внимание?
Гистологическое заключение включает в себя несколько рубрик (полей):
Макроскопическое описание
Заполняется как для биоптатов — не обязательно, так и для операционного материала, для которого имеет крайне важное значение в ряде случаев.
Микроскопическое описание
Описание изменений на микроскопическом уровне, не обязательно к заполнению, так как вся необходимая информация может быть отражена в поле «заключение».
Результаты иммуногистохимического исследования
В этом поле описано какие антитела использовались в данном случае и каков результат окрашивания: наличие окрашивание или его отсутствие, локализация в клетке при необходимости, а также процент позитивных клеток и интенсивность реакции, когда это имеет значение.
Патологоанатомическое заключение
Содержит нозологическую/классификационную единицу, если ее возможно установить по исследованному материалу, то есть дает ответы на вопросы:
Также приводятся все необходимые прогностические данные: степень дифференцировки, параметры, влияющие на стадию, состояние краев резекции, если возможно их оценить и т.п.
Дополнительные замечания и рекомендации
Поле может содержать комментарии, относительно возможного направления дальнейшего обследования, вероятности того или иного диагноза, необходимости ознакомиться с теми или иными клиническими данными и др.
Мы не рекомендуем пациентам самостоятельно заниматься расшифровкой показателей гистологического исследования, используя информацию, полученную на различных Интернет-сайтах и форумах пациентов, так как на интерпретацию данных влияет большое количество факторов, в том числе, возраст пациента, данные других исследований и др.
Расшифровкой исследования может заниматься только специалист – врач онколог по профилю заболевания!
Авторская публикация:
АРТЕМЬЕВА АННА СЕРГЕЕВНА
заведующий патологоанатомического отделения с прозектурой ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, кандидат медицинских наук
Справочник здоровья
ГИСТОЛОГИЯ VS ЦИТОЛОГИЯ
Гистологическое исследование представляет собой взятие образца ткани пациента с помощью биопсии и применяется в тех случаях, когда заболевание находится на стадии развития. В некоторых случаях оно проводится уже после оперативных вмешательств, которые сопровождаются удалением какого-либо органа либо его части.
Анализ подразумевает некоторые временные затраты, так как перед тем, как часть ткани будет рассмотрена и тщательно изучена под микроскопом, её следует законсервировать, погрузить в парафин, выполнить ультратонкие срезы, специально окрасить, и только после выполнения всех этих необходимых процедур подготовленный материал можно изучать и рассматривать под микроскопом. Однако встречаются и такие случаи, когда сделать гистологическое исследование необходимо немедленно, например, в течение часа. Такая мера необходима для того, чтобы хирург имел точную осведомленность относительно того, стоит ли удалять или сохранять орган пациента ради сохранения его жизни.
Цитологическое исследование подразумевает собой оценку формы и состояния клеток и позволяет диагностировать доброкачественные или злокачественные новообразования на разных стадиях, а также неопухолевые поражения клеточной структуры. С помощью него можно получить материал для исследования практически из всех тканей в организме (это, в первую очередь, касается внутренних органов).
Анализ проводится прежде всего для того, чтобы получить точное подтверждение или, наоборот, опровержение наличия/отсутствия злокачественных новообразований. Этот метод довольно часто имеет преимущества по сравнению с другими мерами диагностики при распознавании раковых поражений на начальных стадиях развития. В ряде случаев он позволяет установить не только злокачественный характер заболевания, но и гистологический тип опухоли, что, в свою очередь, имеет огромное значение при прогнозировании заболевания и выборе эффективного метода лечения.
При наличии опухолевого процесса цитология также способствует наиболее раннему подтверждению злокачественного процесса. Положительный результат исследования нередко является главным морфологическим подтверждением клинического диагноза злокачественного характера и избавляет от необходимости проведения биопсии, которая довольно часто является нежелательной, поскольку очень часто существует опасность открытия кровотечения либо диссеминации опухоли (распространению раковых клеток из основного очага по кровеносных и лимфатическим путям по всему организму). При этом отрицательный результат не всегда говорит от том, что злокачественный процесс отсутствует, так как взятый для исследования материал может оказаться не достаточно информативным.
Биопсия не вызывает рак
Наверное, вы уже сталкивались с такой максимой: биопсия вызывает прогрессирование рака. Непонятно, откуда взялось это массовое заблуждение, но, совершенно точно, распространяющие его наносят непоправимый вред пациентам с выявленными новообразованиями. Самое печальное, что этот миф популярен и среди многих врачей не онкологов.
Не проводить биопсию — значит не лечиться.
Биопсия — это единственный метод, который дает понимание наличия злокачественной опухоли, что крайне важно с точки зрения установления онкологического диагноза.
Без биопсии в той или иной форме специалист не будет лечить онкологическое заболевание, и это правильно. Но пациент может считать, что у него есть рак, считать, что биопсию делать нельзя (это, по его мнению, приведет к прогрессированию) и при этом требовать лечения. С такой ситуацией периодически сталкиваются все онкологи. Вряд ли кто-то из них согласится проводить химиотерапию, которая имеет свои риски и осложнения, если не уверен в том, что болезнь действительно есть. Исключения сегодня редки, они могут быть связаны только со сложностями взятия биопсии (когда это сделать технически невозможно). Но при этом используются другие тесты, например, исследование опухолевой ДНК из циркулирующей крови (рутинно не выполняется).
Биопсия крайне важна с точки зрения понимания типа опухоли.
Всего 15-20 лет назад рак молочной железы или рак легких воспринимались как одно заболевание. Сегодня и в том, и в другом случае выделяют разные типы опухоли, которые по-разному протекают, имеют разный прогноз и, самое главное, — разное лечение. Назначение таргетной терапии, иммунотерапии — современных методов лечения — невозможно без исследования опухолевой ткани.
Биопсия может (а в некоторых ситуациях это необходимо) выполняться несколько раз.
Опухоль в процессе своего роста может меняться и приобретать так называемую резистентность (нечувствительность) к лечению. Новая биопсия может дать дополнительную информацию, на основании которой будет планироваться дальнейшее лечение.
Биопсия важна в спорных случаях.
Например, после проведенного лечения, когда имеется участок подозрительной ткани, и нужно определить, что это — рецидив или неспецифическая реакция (гранулематозное воспаление, гипертрофический рубец и проч.).
Биопсия является первым требованием к диагностическому этапу перед лечением любого рака.
Об этом сказано в любых рекомендациях, изданных в странах с развитой медициной. Этих же принципов придерживаются и врачи Рассвета.
Нюансы
Биопсия должна быть выполнена с соблюдением определенных правил. Они не должны нарушаться. Так, тотальная биопсия подразумевает полное удаление опухолевой массы без ее кускования, дробления и размазывания фрагментов опухоли (например, по брюшной полости). Совершенно недопустимо излитие кистозного содержимого подозрительного кистозного образования брюшной полости или малого таза. В этом смысле полостная операция с удалением патологического образования полностью, с соблюдением правил абластики и антибластики (вкратце — нераспространения клеток по здоровым тканям), в широком смысле является биопсией. Операция так и будет называться — лечебно-диагностическая.
Знаменитый миф «про удаленную родинку и появившиеся после этого метастазы» связан не с биопсией или удалением родинки (единственным методом радикального лечения ранней меланомы), а с неправильным удалением меланомы. Если биопсия подозрительного пигментного образования проводится правильным образом, с отступом в несколько миллиметров, и по результатам определяется меланома, — это абсолютно верная тактика. Изучив глубину прорастания, специалист определяет необходимый отступ при повторной операции (широком иссечении рубца), а также показания для дополнительных методов лечения. С другой стороны, если не проводить биопсию в таком случае, то не будет проводиться лечение, а значит, меланома будет расти и давать метастазы.
На самом деле, нет никаких данных, свидетельствующих о прогрессировании рака после биопсии. Он растет и метастазирует сам по себе, то есть независимо от факта проведения биопсии. Не нужно заниматься подменой понятий.
В 2015 году в Mayo clinic было проведено клиническое исследование с включением 2 000 пациентов с неметастатическим раком поджелудочной железы, которое не показало отрицательного влияния биопсии на выживаемость.
Прогрессирование рака после биопсии — это миф.
Гистологическое исследование опухолей
Точная постановка диагноза «рак» невозможна без проведения гистологического анализа.
Гистологическое исследование опухолей является одним из самых достоверных и важных диагностических методов. Гистологическое исследование проводят врачи-патоморфологи, оценивая под микроскопом материал после биопсии (непосредственно фрагмент опухоли) или же операционный материал (удаленный орган или его часть). В дальнейшем при необходимости используются дополнительные методы исследования (иммуногистохимия (ИГХ) и молекулярные исследования).
Данное исследование проводится как для выяснения происхождения опухоли, так и для определения стратегии будущего лечения. Вероятность назначения неправильного лечения велика при отсутствии информации о том, что из себя представляет обнаруженная опухоль. Нельзя ориентироваться лишь на клиническую картину, результаты методов визуализации (рентген, КТ, МРТ) или анализов крови. Зачастую онколог не знает, с чем имеет дело, и может лишь высказать свои предположения, поставив диагноз со знаком «?». Тогда и назначается биопсия с последующим морфологическим исследованием.
Морфологическое исследование является заключительным этапом в диагностическом поиске и позволяет онкологам безошибочно выбирать между тем или иным курсом химиотерапии, или же совсем от нее отказаться в случае получения заключения о доброкачественном процессе.
Кроме 100% точности диагноза, в отдельных случаях гистологическое исследование позволяет расширить, или же наоборот, ограничить объем хирургического вмешательства. Приведем несколько примеров.
Опухоль молочной железы. Первая мысль, которая возникает у женщины – рак! Да, это возможно, но… Существует ряд оговорок. После какого метода исследования был выставлен диагноз? Если это цитологическое исследование (мазки), то есть высокая вероятность ошибочно выставленного диагноза. Это обусловлено тем, что даже «нормальные» клетки эпителия после нанесения на стекло (грубо говоря «размазывания») могут принимать атипичный вид и вводить цитолога в заблуждение. В таком случае просто необходимо гистологическое или иммуногистохимическое (ИГХ) исследование биоптата («кусочка опухоли») врачом-патологоанатомом, который достоверно выставит диагноз. Ведь вероятность того, что опухоль доброкачественная, также есть. В таком случае удалять всю молочную железу и калечить пациентку нет необходимости, а можно ограничиться лишь секторальной резекцией (удалить лишь пораженную часть железы). Или же в случае получения диагноза «лимфома» (такое тоже возможно), вообще не проводить оперативного вмешательства.
Поражение желудка. Опять же, есть вероятность того, что это рак. Но также не исключена и лимфома. В ее случае нет необходимости удалять желудок, а можно ограничиться лишь химиотерапией.
Все зависит, конечно, от качества материала, взятого для исследования и квалификации патоморфолога. Ни один диагноз опухоли, злокачественной или доброкачественной, не выставляется лишь одним врачом. В таких случаях принцип коллегиального просмотра очень важен. Минимум два мнения и четыре глаза. Ведь то, что видит один врач, может пропустить другой или не обратить на это внимания.
Подводя резюме под вышесказанным, можно выделить несколько последовательных этапов до момента постановки правильного диагноза:
— обращение пациента к клиническому врачу/онкологу;
— полное и всестороннее обследование с выявлением опухолевого очага;
— биопсия/удаление образования с его доставкой в лабораторию патоморфологии для морфологической диагностики;
— вместе с материалом предоставляются как можно более полные клинические данные и результаты методов обследования.
Как уже было сказано выше, финальной точкой в диагностическом поиске для клинических врачей является заключение патоморфолога.
Стоимость и срок исследования
| Наименование | Срок | Стоимость, руб. |
|---|---|---|
| Гистология без иммуногистохимии | от 3 дней | 12 500 |
| Гистология с иммуногистохимией | от 3 дней | 28 300 |
* Организация и оплата доставки сырого материала (не в блоках) осуществляется клиентом.
По всем возникшим вопросам Вы можете проконсультироваться у нашего медицинского администратора по телефону: 8-800-555-92-67 или написать нам в WhatsApp: +7 925 740 05 87