Что такое элюент в хроматографии

1.3 Элюент, как составляющая хроматографической системы

запись создана: 06.11.2010 / последнее обновление: 06.11.2010

Для успешного осуществления хроматографического разделения, в первую очередь важно обеспечить умеренное взаимодействие разделяемых веществ с сорбентом, поскольку, как уже говорилось, при отсутствии такого взаимодействия разделение не происходит, а при слишком сильном взаимодействии происходит прочная сорбция компонентов пробы на сорбенте. Они, либо вообще не выходят из колонки, либо выходят неприемлемо долго, и цель хроматографического эксперимента также не достигается.

Если в распоряжении хроматографиста уже есть колонка, заполненная определенным типом сорбента, единственным средством регулирования удерживания компонентов пробы является состав элюента. В качестве элюента могут выступать органические растворители, их смеси, водные растворы органических и неорганических веществ. Каждый растворитель обладает по отношению к конкретному типу сорбента определенной элюирующей силой, под которой понимают способность данного растворителя вымывать (десорбировать) с данного сорбента разделяемые вещества.

Для каждой хроматографической системы растворители по возрастанию или убыванию элюирующей силы можно расположить в элюотропный ряд.

Казалось бы, учитывая то многообразие органических и неорганических веществ, которые можно было бы использовать в качестве растворителей, всегда можно подобрать некое вещество, обладающее в данной хроматографической системе подходящей элюирующей силой.

Во-первых, некоторые вещества сложно использовать в качестве растворителей ввиду их высокой стоимости, токсичности, химической нестойкости или агрессивного воздействия на элементы хроматографической аппаратуры.

Во-вторых, препятствием к использованию в качестве компонентов элюента некоторых растворителей является совокупность их физических свойств, например, высокая вязкость, обуславливающая применение неприемлемо высокого давления на входе в колонку для создания оптимальной скорости протока элюента через слой сорбента. Целый ряд ограничений для использования растворителей в колоночной ЖХ накладывают и способы детектирования веществ, выходящих из колонки, которые также будут рассмотрены далее.

И, наконец, может так оказаться, что требуемая элюирующая сила находится в промежутке между силами двух рядом расположенных в элюотропном ряду растворителей.

Именно из-за совокупности этих причин в качестве основы элюента чаще всего используют смесь двух растворителей – с заведомо более слабой (растворитель А) и с заведомо более сильной (растворитель В) элюирующей силой, чем это необходимо для данного хроматографического разделения.

Компонент А обеспечивает преимущественно транспортную функцию для перемещения в колонке уже десорбированного вещества, компонент В, напротив, являясь конкурентом разделяемых веществ в сорбционных процессах, может их вытеснять с сорбента в объем элюента и, тем самым, значительно уменьшать их время удерживания. Увеличивая долю компонента В в растворителе А, можно плавно менять элюирующую силу этой смеси и добиться практически любой ее величины в промежутке элюотропного ряда от А до В.

Сразу же следует оговориться, что один и тот же растворитель, в зависимости от типа применяемого сорбента, может быть как сильным элюентом, так и слабым. Кроме того, смеси разных растворителей при одинаковой элюирующей силе могут обладать различным воздействием на селективность разделения данной пары веществ. По этой причине иногда часть одного сильного компонента заменяют на другой, также сильный компонент, но с другой селективностью, и элюент получается уже трехкомпонентным. Однако на практике необходимость в этом возникает достаточно редко.

Справочные данные по физико-химическим свойствам растворителей для ЖХ, а также основные концепции использования их смесей в качестве элюентов в ВЭЖХ просто исчерпывающе представлены в 11.

Рис. 1.8. Типичный вид зависимости фактора удерживания
от концентрации компонента В в элюенте.

До сих пор рассматривалось применение элюента одного состава для проведения всего хроматографического эксперимента. Такой режим в хроматографии называется изократическим элюированием (в сленговом варианте – изократом). Однако не всегда задачу качественного разделения смеси удается решить в этом режиме.

Рис. 1.9. Вид хроматограммы при изократическом и градиентном элюировании.

Начальную и конечную концентрации компонента В в элюенте, а так же скорость повышения концентрации (крутизну градиента) определяют экспериментально, исходя из состава пробы и свойств используемой хроматографической системы.

Не смотря на свои преимущества, градиентное элюирование таит в себе ряд проблем, и им увлекаться не стоит.

В любом случае, если есть возможность работать в изократическом режиме элюирования, к градиенту лучше не прибегать, поскольку может так оказаться, что некоторая экономия времени, полученная при проведении разделения в градиенте, полностью поглотится затратами времени, необходимого на переход к стартовому составу элюента и уравновешивание им сорбента. Кроме того, использование градиентного элюирования требует повышенной чистоты растворителей, применяемых при изготовлении элюента. В противном случае, примеси в слабом компоненте (А) могут накопиться на начальной стадии хроматографического разделения в колонке и выйти в градиентном режиме в виде ложных пиков (не соответствующих ни одному из компонентов пробы), значительно затрудняя при этом интерпретацию хроматограммы.

Источник

Элюент

Источник:

(утв. Росгидрометом 11.01.1996)

Смотреть что такое «Элюент» в других словарях:

элюент — сущ., кол во синонимов: 1 • растворитель (67) Словарь синонимов ASIS. В.Н. Тришин. 2013 … Словарь синонимов

элюент — – подвижная фаза. Словарь по аналитической химии [3] … Химические термины

Элюент — Смотри Элюент (инфлюент) … Энциклопедический словарь по металлургии

элюент — eliuentas statusas T sritis chemija apibrėžtis Skystis, išplaunantis iš adsorbento sugertąsias medžiagas. atitikmenys: angl. eluant; eluent rus. элюент … Chemijos terminų aiškinamasis žodynas

элюент — элю ент, а … Русский орфографический словарь

элюент — элю/ент/ … Морфемно-орфографический словарь

Элюент (инфлюент) — [eluent] раствор, поступающий в хроматографическую колонку и вымывающий разделенные компоненты, или растворитель для элюирования … Энциклопедический словарь по металлургии

ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ — вид хроматографии, в к рой подвижной фазой (элюентом) служит жидкость. Неподвижной фазой м. б. твердый сорбент, твердый носитель с нанесенной на его пов сть жидкостью или гель. Различают колоночную Ж. х., в к рой через колонку, заполненную… … Химическая энциклопедия

Количественный анализ — раздел аналитической химии, в задачу которого входит определение количества (содержания) элементов (ионов), радикалов, функциональных групп, соединений или фаз в анализируемом объекте. Содержание 1 Цели количественного анализа 2 Методы… … Википедия

Источник

Что такое хроматография? Типы и применения

Слово «хроматография» означает «цветное письмо», но оно является неправильным, потому что оно часто не включает бумагу, чернила, цвет или письмо.

Михаил Семёнович Цвет (1872-1919)— русский ботаник-физиолог и биохимик растений, создатель хроматографического метода.

M.С. Цвет использовал хроматографичекий метод для разделения пигментов растений. Для разделения хлорофиллов Цвет наполнял стеклянную трубку (колонку) твердым адсорбентом (например, инулином) и наносил на верхний слой экстракт хлорофиллов в лигроине. Затем промывал колонку лигроином. Цвет писал так – «Из нижнего конца воронки вытекает сначала бесцветная, потом желтая жидкость (каротин), в то время как в поверхностных слоях инулинового столба возникает интенсивное зеленое кольцо, на нижнем крае которого быстро образуется желтая кайма.

При последующем пропускании через инулиновый столб чистого лигроина, оба кольца, зеленое и желтое, значительно расширяются и распространяются вниз до известного предела». «Как цветные лучи солнечного спектра различные компоненты из смеси пигментов были выделены и могли анализироваться дальше количественно и качественно». 2 Результат разделения, а именно последовательность различных цветовых зон Цвет назвал – хроматограммой. Для разделения пигментов Цвет использовал более ста различных адсорбентов, детально отработал технику разделения и предложил различные варианты аппаратов для своего метода (хроматографов).

Последнее время появилось ряд сообщений авторитетных российских химиков о том, что практически параллельно с западными учеными первые работы в области аналитической газовой хроматографии выполнили в 1940-е г.г. советские исследователи М.М. Сенявин, Н.М. Тулькертауб, А.А. Жуховицкий и Д.А. Вяхирев. Это были работы по газо-адсорбционному разделению, выполненные задолго до широко известной публикации А. Джеймса и А. Мартина в 1952 г., от которой официально ведет отсчет история газовой хроматографии. 4

Метод хроматографии основан на динамическом процессе распределения веществ между двумя фазами — неподвижной (твёрдая фаза или жидкость, связанная на инертном носителе) и подвижной (газовая или жидкая фаза, элюент). В зависимости от природы взаимодействия компонентов смеси с неподвижной и подвижной фазами и индивидуальных свойств, компоненты движутся с различной скоростью, что позволяет разделять их между собой.
Основные термины и понятия, относящиеся к хроматографии, а также области их применения были систематизированы и унифицированы специальной комиссией ИЮПАК. Согласно рекомендациям ИЮПАК, термин «хроматография» имеет три значения и используется для обозначения специального раздела химической науки, процесса, а также метода. 6

Существуют различные способы классификации хроматографических методов: по физическому состоянию подвижной фазы (газовая и жидкостная хроматографии), по технике выполнения хроматографического разделения (колоночная, плоскостная, хроматография в полях сил), по природе взаимодействия разделяемых компонентов с неподвижной фазой (адсорбционная, ионообменная, эксклюзионная и др.) и др.
Современная хроматография имеет много разновидностей, наиболее популярные их них, которые помогут вам получить более полное представление о процессе представлены ниже. Мы попытались объяснить их очень простым языком.

Основы хроматографии

По своей сути хроматография включает взаимодействие двух разных фаз. Химическое соединение в одном состоянии вещества (например, жидкость или газ) перемещается по поверхности другого вещества в другом состоянии вещества (например, твердое вещество или жидкость).

Движущееся соединение известно как подвижная фаза, в то время как устойчивое вещество (которое вообще не движется) называется стационарной фазой. Компоненты подвижной фазы отделяются, когда она движется по стационарной фазе. Затем химики могут анализировать отдельные компоненты один за другим.

4 разных типа хроматографии

Существует несколько видов хроматографии, каждый из которых имеет свой вид подвижной и стационарной фазы. Хотя основной принцип остается тем же самым, способ взаимодействия различных компонентов с подвижной фазой и стационарной фазой может варьироваться в зависимости от используемого хроматографического метода.

Ниже приведен список основных типов хроматографии, которые помогут вам получить более полное представление о процессе. Мы попытались объяснить их очень простым языком.

1. Бумажная хроматография

Бумажная хроматография является наиболее распространенным и простым аналитическим методом для разделения и обнаружения цветных компонентов, таких как пигменты. Хотя в современных лабораториях чаще используют тонкослойную хроматографию, он все еще является мощным учебным пособием.

В этом методе каплю образца смеси (например, чернил) помещают вблизи края фильтровальной бумаги, а затем бумагу подвешивают вертикально, при этом ее край погружают в растворитель (вода или спирт). Бумагу подвешивают таким образом, что пятно чернил не должно касаться растворителя и остается немного над ним.

Через некоторое время растворитель (подвижная фаза) начинает постепенно продвигаться вверх по бумаге (неподвижная фаза) посредством капиллярных сил. Поскольку растворитель движется вверх, он увлекает красители, присутствующие в чернилах, вместе с ним.

Когда он поднимается, мы видим разные цвета на фильтровальной бумаге. Эти цвета представляют различные красители, присутствующие в чернилах. Поскольку разные красители имеют разные уровни растворимости и движутся с разной скоростью, когда растворитель поднимается, мы видим полосы разного цвета на разной высоте.

Вот как бумажная хроматография используется для разделения разных компонентов чернил. В некоторых случаях смеси не содержат цветных компонентов, поэтому химики добавляют другие вещества для идентификации.

2. Тонкослойная хроматография

Тонкослойная хроматография очень похожа на бумажную хроматографию. Основное отличие состоит в том, что вместо куска бумаги у нас есть предметное стекло, покрытое слоем силикагеля (неподвижная фаза). В этом методе на нижний край предметного стекла с силикагелем наносятся капли раствора исследуемой смеси, лежащие на отрезке, параллельном нижнему краю и отстоящем от него на такое расстояние, чтобы капли не погружались в элюент.

Когда они подсохнут, предметное стекло нижним краем погружается в слой растворителя (элюент). Предметное стекло с неподвижной фазой удаляется из резервуара с растворителем, когда растворитель (подвижная фаза) достигает верхнего края стекла. Различные соединения в смеси перемещаются вверх по слою силикагеля с различной скоростью в виде пятен. Эти отделенные пятна затем визуализируются в ультрафиолетовом свете.

В некоторых случаях для визуализации пятен используются химические процессы: например, серная кислота обугливает большинство органических компонентов, оставляя темное пятно на предметном стекле. Это простая и быстрая техника для разделения смесей органических соединений. Она часто используется для определения пигментов, анализа состава красителей в волокнах и выявления инсектицидов или пестицидов в пищевых продуктах.

По сравнению с бумажной хроматографией, применение тонкослойной хроматографии приводит к лучшему разделению.

3. Газовая хроматография

Обычно количество пробы газа невелико, порядка микролитров. Подвижную фазу в газовой хроматографии называют газом-носителем. Поскольку мы не хотим, чтобы газ-носитель (подвижная фаза) реагировал с образцом, это должен быть инертный газ, такой как гелий, или нереакционноспособный газ, такой как азот. Колонка для газовой хроматографии (металлическая или стеклянная трубка) содержит неподвижную фазу тонкий слой жидкости или полимера на инертной твердой подложке.

Разделение компонентов в смеси происходит за счет разницы в их температурах кипения – соединения с низкой температурой кипения движутся быстрее компонентов с более высокой температурой кипения, а также за счет полярности и других специфических взаимодействий с подвижной фазой.

Это приводит к тому, что каждый компонент элюируется в разное время, также называемое временем удерживания компонента. Сравнивая времена удерживания разделенных компонентов с временами удерживания известных соединений, химики могут анализировать соединения в смеси.

4. Жидкостная хроматография

Колонка обычно представляет собой металлическую или пластиковую трубку, заполненную крошечными частицами сорбента с определенным химическим составом поверхности. Поскольку каждое соединение в смеси по-разному реагирует с сорбентом (из-за различий в размерах, адсорбции и ионного обмена), они движутся в колонке с разными скоростями, что обеспечивает разделение их между собой. Выбор состава подвижной фазы зависит от свойств неподвижной фазы и анализируемых веществ.

Химики проводят серию тестов и отрабатывают методику разделения, чтобы найти оптимальный метод жидкостной хроматографии для смеси, который может обеспечить идеальное разделение пиков.

Применение

За научные исследования в области хроматографии или с применением хроматографического метода были присуждены несколько Нобелевских премий.

Более 60 процентов химических исследований во всем мире проводится с помощью различных видов хроматографии. Современные хроматографы способны разделить и идентифицировать несколько сотен соединений за один анализ. Некоторые хроматографические детекторы могут определять количество вещества в масштабе ppb.

Благодаря этим преимуществам, хроматография в настоящее время широко используется в

Помимо этого, хроматография также используется для расшифровки ДНК и в биоинформатике, клинической диагностике заболеваний и расстройств, а также в различных исследовательских целях.

1 Е.М. Сенченкова. Михаил Семенович Цвет. Москва: Издательство «Наука», 1973
2 М.С. Цвет «Хроматографический адсорбционный анализ. Избранные работы. Под ред. А.А. Рихтера и Т.А. Красносельской. Изд-во АН СССР. 1946
3 Измайлов Н.А., Шрайбер М.С.. Капельно-хроматографический метод анализа и его применение в фармации. Фармация. 1938, №3.с.1-7
4 Р.Х. Хамизов, В.Ф. Селеменев. Кто открыл газовую хроматографию? // Сорбционные и хроматографические процессы. 2018. Т. 18. № 2. С 128-130
5 «Сто лет хроматографии» В. А. Даванков, Я. И. Яшин // Вестник РАН, 2003, том 73, № 7, с. 637-646
6 Nomenclature for Chromatography // Pure and Appl. Chem. 1993.Т. 65, № 4. С. 819—872

Источник

Хроматография

Хроматография

Подвижная фаза представляет собой поток жидкости или газа, проходящий через неподвижную фазу и переносящий вещество.

Процесс разделения основывается на различном сродстве исследуемых соединений к подвижной и неподвижной фазам: вещества движутся к «финишу» с различными скоростями и, т. о., разделяются.

Основные виды хроматографии:

Жидкостная хроматография:
Колоночная хроматография Тонкослойная хроматография Высокоэффективная жидкостная хроматография

Газовая хроматография Ионообменная хроматография Бумажная хроматография Гель-фильтрационная хроматография Аффинная хроматография

Общие черты различных видов хроматографии:

Все хроматографические методы анализа характеризуются общими чертами:

Колоночная хроматография

Область применения

0.15. Отделение целевого вещества от не сорбирующихся примесей. Пример: Отделение целевого вещества от неорганических примесей или примесей с Rf

Оборудование

Типичный прибор для колоночной хроматографии приведен на рисунке:

Все что необходимо для проведения колоночной хроматографии можно посмотреть на фото:

Элюент

1. Выделяемые вещества не должны взаимодействовать с элюентом или разрушаться при его присутствии. Пример: гидролиз эпоксидов или ацеталей водой на силикагеле.

2. Элюент может быть или индивидуальным растворителем или смесью нескольких растворителей. Растворители должны легко удаляться после выделения веществ (поэтому диметилсульфоксид (ДМСО) или диметилформамид (ДМФА) не подходят из-за высокой температуры кипения).

3. Элюент подбирают таким образом, чтобы на тонкослойной хроматограмме смеси (желательно на том же сорбенте), Rf продуктов различался не менее 0.15, и пятна выходили с Rf не более 0.5-0.6 после одного прогона хроматограммы.

4. Если под действием растворителей различной полярности (полярных (метанол, возможно с добавлением уксусной кислоты или триэтиламина) и неполярных (гексан, пентан)) вещество не сдвигается со старта или двигается с фронтом, следует перейти к другому сорбенту. Пример: Rf = 0, так ведут себя высоко полярные вещества (ионные жидкости, амины) на силикагеле; или неполярные вещества на сорбентах с обращенной фазой. Пример: Rf = 1, так ведут себя неполярные вещества на силикагеле; или высоко полярные вещества (ионные жидкости, амины) на сорбентах с обращенной фазой.

o Добавление элюента. Элюент добавляется или непосредственно, или при помощи капельной (делительной) воронки. Важно! При проведении хроматографирования слой сорбента ни в коем случае не должен пересыхать, иначе может произойти его растрескивание, приводящее к снижению разделяющей способности.

Хроматографическая колонка и количество сорбента

0.5 грамма смеси 2-х веществ с разницей в Rf

0.4 требуется колонка около 2.5 см шириной.

Сорбент

1. Разделяемые вещества не должны разрушаться в присутствии сорбента. Пример:разделение и очистка ацеталей на силикагеле (у него кислая реакция) практически невозможна из-за их разрушения. В то время как на нейтральном Al2O3 их удается эффективно очистить.

2. Если под действием растворителей различной полярности (полярных (метанол, возможно с добавлением уксусной кислоты или триэтиламина) и неполярных (гексан, пентан)) вещество не сдвигается со старта или двигается с фронтом, следует перейти к другому сорбенту (от полярного сорбента к неполярному и наоборот). Пример 1: Rf = 0, так ведут себя высоко полярные вещества (ионные жидкости, амины) на силикагеле; или неполярные вещества на сорбентах с обращенной фазой. Пример 2: Rf = 1, так ведут себя неполярные вещества на силикагеле; или высоко полярные вещества (ионные жидкости, амины) на сорбентах с обращенной фазой.

Рекомендации при проведении

Современные методы колоночной хроматографии позволяют, пожалуй, разделять смеси любого состава. Для этого необходимо тщательно подобрать для каждого компонента смеси: элюент и сорбент.

Перед проведением колоночной хроматографии необходимо подобрать элюент и сорбент при помощи тонкослойной хроматографии. Для эффективной очистки выделяемого компонента смеси должно иметь значение Rf должно быть

Тонкослойная хроматография

Область применения

Оборудование

Типичный прибор для проведения ТСХ анализа приведен на рисунке:

Капилляр. Представляет собой стеклянную трубку с внутренним диаметром 0.3-1.0 мм, вытянутую в пламени Важно! Оба конца капилляра должны быть открыты. Края капилляра должны быть ровными, чтобы не царапать слой сорбента и при легком прикосновении переносить раствор вещества на пластину. Важно! Чем уже капилляр, тем легче получить небольшое пятно вещества на пластине. В качестве капилляра также удобно использовать насадки для пипетмана (см. фото выше). Ёмкость для ТСХ. Химический стакан с плоским дном, на дно которого наливается элюент слоем 4-6 мм. Для воспроизводимых результатов дно и стенки емкости выкладываются фильтровальной бумагой, которая пропитывается элюентом. Емкость закрывается крышкой (или чашкой Петри, часовым стеклом) для избежания испарения элюента.

Элюент

1. Выделяемые вещества не должны взаимодействовать с элюентом или разрушаться в его присутствии. Пример: гидролиз эпоксидов или ацеталей водой на силикагеле.

2. Элюент может быть или индивидуальным растворителем или смесью нескольких растворителей. Растворители должны легко удаляться после проведения анализа (поэтому диметилсульфоксид (ДМСО) или диметилформамид (ДМФА) не подходят из-за высокой температуры кипения).

3. Элюент подбирают таким образом, чтобы пятно целевого вещества выходило с Rf не более 0.5-0.6 после одного прогона хроматограммы и было хорошо дифференцировано от примесей (

0.1 Rf). Если на старте остались еще вещества (Rf = 0, «сидят на старте»), следует сменить элюент и проанализировать состав этой смеси. Иногда целевое вещество может «сидеть на старте».

4. Если под действием растворителей различной полярности (полярных (метанол, возможно с добавлением уксусной кислоты или триэтиламина) и неполярных (гексан, пентан)) вещество не сдвигается со старта или двигается с фронтом, следует перейти к другому сорбенту.
Пример: Rf = 0, так ведут себя высоко полярные вещества (ионные жидкости, амины) на силикагеле; или неполярные вещества на сорбентах с обращенной фазой.
Пример: Rf = 1, так ведут себя неполярные вещества на силикагеле; или высоко полярные вещества (ионные жидкости, амины) на сорбентах с обращенной фазой. Ряд растворителей по полярности см. здесь.

Количество элюента. Элюент наливается в емкость до образования слоя 4-6 мм. Важно! Пластину погружают в элюент так, чтобы пятна веществ не соприкасались непосредственно с элюентом, иначе произойдет вымывание веществ в элюирующую смесь.

Сорбент.

1. Разделяемые вещества не должны разрушаться в присутствии сорбента. Пример:разделение и очистка ацеталей на силикагеле (у него кислая реакция) практически невозможна из-за их разрушения. В то время как на нейтральном Al2O3 их удается эффективно разделить.

2. Если под действием растворителей различной полярности (полярных (метанол, возможно с добавлением уксусной кислоты или триэтиламина) и неполярных (гексан, пентан)) вещество не сдвигается со старта или двигается с фронтом, следует перейти к другому сорбенту (от полярного сорбента к неполярному и наоборот).
Пример 1: Rf = 0, так ведут себя высоко полярные вещества (ионные жидкости, амины) на силикагеле; или неполярные вещества на сорбентах с обращенной фазой.
Пример 2: Rf = 1, так ведут себя неполярные вещества на силикагеле; или высоко полярные вещества (ионные жидкости, амины) на сорбентах с обращенной фазой.

Пластина

1. Ширина пластины определяется: по 5 мм от краев пластины, и 4-6 мм расстояние между пятнами. Длина пластины: от 5 см (для хорошо разделяющихся веществ) до 10 см или более (для сложных смесей).

2. Линия «старта» проводится карандашом на расстоянии 5-7 мм от нижнего края пластины, с этого же края отрезаются уголки (

2 мм) для того, чтобы фронт элюента шел по пластине ровным слоем.

5. Линия «финиша» проводится карандашом после окончания элюирования на расстоянии 3-5 мм от верхнего края пластины. Важно! Для воспроизводимых результатов фронт элюента не должен достигать края пластины. Типичную ТСХ пластину после проведения анализа и проявления пятен можно посмотреть ниже:

Большинство органических соединений не окрашены, т. о. не удается визуально определить положение пятен на пластине. Поэтому, после проведения ТСХ анализа требуется проявить пятна в ультрафиолетовом свете (УФ), йоде (I2) или под действием специальных реагентов.

Рекомендации при проведении

Подбор элюента и сорбента для тонкослойной (ТСХ) и колоночной (КХ) хроматографии (Методика)

1. Подбор элюента для тонкослойной хроматографии (ТСХ).

Так как наиболее часто используются пластины с силикагелем в качестве сорбента разберем подбор элюента именно на них. Методика не отличается в случае окиси алюминия в качестве сорбента, и обратна в случае сорбентов с обращенной фазой.

Ключевым моментом при подборе растворителя является относительная полярность растворителей.

На несколько пластин длиной

1 см наносится раствор разделяемой смеси.

Верхнее вещество с Rf = 0.2 уже можно выделить в индивидуальном виде колоночной хроматографией. Часть смеси осталось на старте, следует продолжить подбор элюента для анализа ее состава. Для этого следует использовать более полярные системы. Например, смеси н-гексан/этилацетат (от

5:1), бензол, толуол, хлороформ.

2:1 до чистого этилацетата), хлористый метилен

В выбранной смеси на колонке уже не удастся разделить первые 4 вещества, скорее всего, будут получены смеси 1+2 и 3+4, однако, возможно, удастся выделить 5 вещество (хотя, скорее, оно захватит часть от 3+4) и, скорее всего, удастся выделить 6 вещество. Однако, часть смеси еще на старте. Переходим к сильно полярным растворителям: метанол, метанол + добавка кислоты (уксусная) или основания (триэтиламин), изопропанол, этанол и т. п.

Иногда компонент смеси идет с фронтом элюента уже в неполярном гексане. Или не сдвигается со старта метанолом с добавкой триэтиламина. В этом случае для его очисти необходимо использовать другой сорбент (обращенная фаза, сефадекс и т. д.).

2. Определение устойчивости компонентов смеси на данном сорбенте в данном элюенте (двумерная тонкослойная хроматография).

На Пластину ТСХ размерами 6х6 см в нижний левый край на расстоянии 5 мм от обоих краев наносят раствор вещества.

Пластину элюируют найденным в 1 пункте этой статьи элюентом.

Пластину высушивают при комнатной температуре в течении 10-20 минут. Пластину элюируют расположив вниз тем левым боком вниз (в элюент).

Высушивают пластину и проявляют.

Если количество пятен не отличается от количества пятен при одномерном (обычной) тонкослойном хроматографическом анализе, значит вещество стабильно в выбранной системе (все пятна располагаются вдоль диагонали пластины) (См. Вариант А на рисунке выше). Если появляются «лишние» пятна (лежат не на диагонали пластины) значит вещество не стабильно (См. Вариант Б на рисунке выше) и следует заменить или элюент (например, протонный на апротонный) или сорбент (кислый силикагель на нейтральную окись алюминия).

Источник